| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 文献回顾 | 第18-33页 |
| 第一部分 TNFΑ诱导肝癌细胞钙离子内流的作用研究 | 第33-42页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1 研究对象 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.3 仪器耗材 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第34-35页 |
| 2.2 细胞传代 | 第35页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第35-36页 |
| 2.4 细胞胞浆钙离子染色(Fura-2/AM染料法) | 第36页 |
| 2.5 细胞胞浆钙离子水平检测 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-40页 |
| 3.1 TNFα诱导HCC细胞胞浆钙离子水平升高 | 第37-39页 |
| 3.2 TNFα诱导HCC细胞胞外钙离子内流 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 TNFΑ诱导钙离子内流的机制研究 | 第42-63页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| 1.1 研究对象 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.3 仪器耗材 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-52页 |
| 2.1 细胞胞浆钙离子染色(Fura-2/AM染色法) | 第44-45页 |
| 2.2 细胞胞浆钙离子水平检测 | 第45页 |
| 2.3 siRNA片段转染 | 第45-46页 |
| 2.4 real-timePCR检测靶基因在肝癌细胞中的mRNA表达水平 | 第46-48页 |
| 2.5 免疫印迹检测特定蛋白表达水平 | 第48-51页 |
| 2.6 免疫共沉淀 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-60页 |
| 3.1 qPCR和Westernblot检测TNFR1和TNFR2在SNU739和HLF细胞中的表达水平 | 第52页 |
| 3.2 siRNA片段靶向沉默TNFR1 | 第52-53页 |
| 3.3 siRNA靶向沉默TNFR1对TNFR2的反馈调节 | 第53-54页 |
| 3.4 沉默TNFR1对TNFα诱导的钙离子内流的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 电压型离子通道抑制剂对TNFα诱导的钙离子内流的影响 | 第55-56页 |
| 3.6 TRP通道抑制剂对TNFα诱导的钙离子内流的影响 | 第56页 |
| 3.7 qPCR检测多种TRP通道分子的mRNA表达水平 | 第56-58页 |
| 3.8 siRNA靶向沉默TRPM7 | 第58页 |
| 3.9 沉默TRPM7对TNFα介导的胞外钙离子内流的影响 | 第58-59页 |
| 3.10 TNFα激活TRPM7通道的机制研究 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 第三部分 TNFΑ诱导钙离子内流促进细胞凋亡的作用研究 | 第63-87页 |
| 1 材料 | 第63-65页 |
| 1.1 研究对象 | 第63页 |
| 1.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 1.3 仪器耗材 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-73页 |
| 2.1 细胞培养 | 第65页 |
| 2.2 细胞胞浆钙离子水平的检测(Fura-2/AM) | 第65页 |
| 2.3 免疫印迹 | 第65页 |
| 2.4 pcDNA3.1-PV质粒的构建 | 第65-69页 |
| 2.5 构建稳定过表达PV基因的肝癌细胞株质 | 第69-70页 |
| 2.6 siRNA片段的转染 | 第70页 |
| 2.7 裸鼠皮下成瘤 | 第70-71页 |
| 2.8 裸鼠尾静脉注射及肿瘤大小测量 | 第71-72页 |
| 2.9 TUNEL检测细胞凋亡 | 第72页 |
| 2.10 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-84页 |
| 3.1 BAPTA-AM螯合胞浆钙离子抑制TNFα诱导的细胞凋亡 | 第73-74页 |
| 3.2 过表达PV蛋白抑制TNFα诱导的细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 3.3 抑制TRP通道抑制TNFα诱导的细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 3.4 沉默TRPM7通道抑制TNFα诱导的细胞凋亡 | 第76-77页 |
| 3.5 体内实验：过表达PV蛋白抑制TNFα介导的抗肿瘤生长作用 | 第77-78页 |
| 3.6 过表达PV蛋白抑制抗肿瘤药物TNFα诱导的细胞凋亡 | 第78页 |
| 3.7 离子霉素诱导胞浆钙离子水平升高促进TNFα介导的细胞凋亡 | 第78-80页 |
| 3.8 IP3诱导胞浆钙离子水平升高促进TNFα介导的细胞凋亡 | 第80-82页 |
| 3.9 体内实验：离子霉素联合TNFα治疗抑制肝癌细胞生长 | 第82-83页 |
| 3.10 离子霉素联合TNFα显著提高TNFα的肿瘤杀伤活性 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| 第四部分 TNFΑ诱导钙离子内流促进肝癌细胞凋亡的机制研究 | 第87-101页 |
| 1 材料 | 第87-88页 |
| 1.1 研究对象 | 第87页 |
| 1.2 主要试剂 | 第87页 |
| 1.3 仪器耗材 | 第87-88页 |
| 2 方法 | 第88-91页 |
| 2.1 细胞培养 | 第88页 |
| 2.2 calpain酶活性检测 | 第88-89页 |
| 2.3 免疫印迹 | 第89页 |
| 2.4 线粒体膜电位检测(TMRM法) | 第89页 |
| 2.5 线粒体染色(Mito-TrackerRed) | 第89-90页 |
| 2.6 免疫荧光 | 第90-91页 |
| 3 结果 | 第91-98页 |
| 3.1 TNFα诱导钙离子内流激活calpain酶 | 第91页 |
| 3.2 TNFα激活calpain促进抗凋亡蛋白cIAP2,XIAP水解 | 第91-92页 |
| 3.3 TNFα激活calpain促进caspase3活化 | 第92页 |
| 3.4 靶向沉默TNFR1对calpain酶活性的影响 | 第92-93页 |
| 3.5 calpeptin抑制calpain阻断TNFα介导的细胞凋亡 | 第93-94页 |
| 3.6 过表达PV对TNFα介导的TNFα/Ca~(2+)/calpain信号通路的影响 | 第94-95页 |
| 3.7 离子霉素对TNFα介导的TNFα/Ca2+/calpain信号通路的影响 | 第95-96页 |
| 3.8 TNFα处理对肝癌细胞线粒体膜电位的影响 | 第96-97页 |
| 3.9 TNFα处理对肝癌细胞细胞色素c亚定位的影响 | 第97页 |
| 3.10 TNFα处理对Bcl-2家族分子转位的影响 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| 小结 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 附录 | 第111-114页 |
| 个人简历和研究成果 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
