| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 一、前言 | 第12-25页 |
| 1. 纺锤体组装检查点(Spindle Assembly Checkpoint, SAC) | 第12页 |
| 2. 泛素蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome system,UPS) | 第12-14页 |
| 2.1 泛素蛋白酶体途径(UPS)简介 | 第13页 |
| 2.2 泛素蛋白酶体途径(UPS)在细胞周期控制中的作用 | 第13-14页 |
| 3. 后期促进复合物(anaphase-promoting complex/cyclosome,APC/C) | 第14-19页 |
| 3.1 APC/C的激活因子Cdc20 | 第14-15页 |
| 3.2 APC/C的结构 | 第15-17页 |
| 3.3 在细胞周期中,APC/C~(Cdc20)的活性 | 第17-19页 |
| 4. 在有丝分裂中,APC/C~(Cdc20)活性调节的研究进展 | 第19-23页 |
| 4.1 通过磷酸化激活胞质APC/C~(Cdc20) | 第19-20页 |
| 4.2 动粒通过去磷酸化介导Cdc20的激活 | 第20-21页 |
| 4.3 在动粒区,纺锤体装配检查点抑制APC/C~(Cdc20) | 第21-22页 |
| 4.4 在动粒区,激活和抑制APC/C~(Cdc20)的机制的整合 | 第22-23页 |
| 5. 核仁蛋白Dnt1 | 第23页 |
| 6. 本论文的研究目的、内容和意义 | 第23-25页 |
| 二、材料和方法 | 第25-57页 |
| 1 材料 | 第25-41页 |
| 1.1 大肠杆菌菌株 | 第25页 |
| 1.2 酵母菌株 | 第25-28页 |
| 1.3 质粒 | 第28-29页 |
| 1.4 引物 | 第29-31页 |
| 1.5 主要试剂或耗材 | 第31-32页 |
| 1.6 主要仪器与设备 | 第32-34页 |
| 1.7 常用培养基、主要缓冲溶液的配制 | 第34-41页 |
| 2 方法 | 第41-48页 |
| 2.1 Transl-T1感受态细胞和BL21感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 2.2 质粒DNA的细菌转化 | 第42页 |
| 2.3 质粒DNA的制备 | 第42-44页 |
| 2.4 琼脂糖凝胶回收DNA片段 | 第44-45页 |
| 2.5 PCR产物回收 | 第45页 |
| 2.6 常规PCR | 第45-46页 |
| 2.7 定点突变PCR | 第46-47页 |
| 2.8 DNA酶切反应 | 第47页 |
| 2.9 DNA连接 | 第47-48页 |
| 3. 裂殖酵母菌株的构建 | 第48-57页 |
| 3.1 酵母杂交和镜检 | 第48页 |
| 3.2 解剖 | 第48-49页 |
| 3.3 酶解 | 第49页 |
| 3.4 孢子涂布培养 | 第49页 |
| 3.5 筛选目的菌株—影印法 | 第49-50页 |
| 3.6 Drop Test | 第50-51页 |
| 3.7 玻璃珠破碎法提取裂殖酵母基因组 | 第51页 |
| 3.8 裂殖酵母LiAc法转化程序 | 第51-52页 |
| 3.9 免疫印迹检测 | 第52-53页 |
| 3.10 Pull Down实验 | 第53-55页 |
| 3.11 纺锤体组装检验点沉默分析实验 | 第55页 |
| 3.12 Cdc13-GFP在SPB或细胞核内定位信号的计数方法 | 第55-57页 |
| 三、实验结果与分析 | 第57-70页 |
| 1 dnt1△加强APC/C突变体的温度敏感性 | 第57-58页 |
| 2 去除SAC可以减弱dnt1△对于APC/C突变体温度敏感性加强的效应 | 第58-60页 |
| 3 缺失dma1可以部分减弱dnt1△对于APC/C突变体温度敏感性加强的效应 | 第60-62页 |
| 4 表达两倍的Slp1不能拯救dnt1缺失对cut20-100或者cut23-547的温度敏感性加强的效应 | 第62-63页 |
| 5 dnt1△的菌株对微管解聚药物TBZ的敏感性可能是由于Slp1水平的降低所引起的。 | 第63-65页 |
| 6 Dnt1功能性同源蛋白的寻找 | 第65-70页 |
| 6.1 p31~(comet)不能拯救dnt1△突变体对微管解聚药物TBZ的敏感性 | 第65-67页 |
| 6.2 CUEDC2可以微弱地拯救dnt1△突变体对微管解聚药物TBZ的敏感性 | 第67-70页 |
| 四、讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-84页 |
| 1 Dnt1调控APC/C活性机制的探究 | 第79-84页 |
| 1.1 Dnt1与APC/C亚基Apc13的相互作用 | 第79-80页 |
| 1.2 Dnt1与MCC复合物组分Mad2的相互作用 | 第80-82页 |
| 1.3 在体内Slp1与Dntl存在相互作用 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
