| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 肺动脉高压概述 | 第12-13页 |
| 1.2 PDGF在肺动脉高压中的概述 | 第13-14页 |
| 1.3 miRNA的研究概述 | 第14-15页 |
| 1.4 miRNA在肺动脉高压中的调控作用 | 第15-16页 |
| 1.5 组蛋白乙酰化在肺动脉高压中的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.6 EP300在细胞中的研究进展 | 第18页 |
| 1.7 本课题研究目的、内容与意义 | 第18-20页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 分子克隆相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 细胞培养相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 药物和转染试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 荧光定量PCR相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.5 westernblots相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.6 动物实验相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.7 其他试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.8 分子生物学相关软件 | 第21页 |
| 2.2 仪器与耗材 | 第21-22页 |
| 2.2.1 细胞系 | 第21页 |
| 2.2.2 动物 | 第21页 |
| 2.2.3 细胞培养相关仪器 | 第21页 |
| 2.2.4 细菌实验相关仪器 | 第21页 |
| 2.2.5 离心机 | 第21页 |
| 2.2.6 PCR相关仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.7 DNA/RNA浓度测量仪器 | 第22页 |
| 2.2.8 核酸电泳相关仪器 | 第22页 |
| 2.2.9 蛋白质检测相关仪器 | 第22页 |
| 2.2.10 显微镜 | 第22页 |
| 2.2.11 荧光素酶活性检测仪器 | 第22页 |
| 2.2.12 其他仪器 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-37页 |
| 2.3.1 RPASMC原代细胞分离 | 第22-23页 |
| 2.3.1.1 大鼠心脏和肺动脉组织获取 | 第22-23页 |
| 2.3.1.2 细胞分离 | 第23页 |
| 2.3.2 瞬时转染 | 第23-25页 |
| 2.3.2.1 质粒PEI转染 | 第23-24页 |
| 2.3.2.2 miRNAmimic和siRNA的SI转染 | 第24-25页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第25页 |
| 2.3.3.1 常氧下细胞培养 | 第25页 |
| 2.3.3.2 缺氧下细胞培养 | 第25页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR | 第25-29页 |
| 2.3.4.1 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.4.2 miRNA的检测 | 第26-28页 |
| 2.3.4.3 mRNA的检测 | 第28-29页 |
| 2.3.5 Westernblot检测蛋白质的表达水平 | 第29-32页 |
| 2.3.6 细胞功能实验 | 第32-34页 |
| 2.3.6.1 细胞增殖实验 | 第32-33页 |
| 2.3.6.2 细胞迁移实验 | 第33-34页 |
| 2.3.7 miRNA靶基因的生物学预测 | 第34页 |
| 2.3.8 3′-UTR荧光素酶报告基因测定 | 第34-36页 |
| 2.3.9 数据处理 | 第36-37页 |
| 第3章 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 miR-1281通过靶向HDAC4调控RPASMC的增殖和迁移 | 第37-48页 |
| 3.1.1 在PASMCs中PDGFBB诱导miR-1281显著下调 | 第37-39页 |
| 3.1.2 miR-1281抑制PASMCs的增殖和迁移 | 第39-41页 |
| 3.1.3 在RPASMC细胞中HDAC4是miR-1281的靶基因 | 第41-43页 |
| 3.1.4 HDAC4促进PASMCs的增殖和迁移 | 第43-44页 |
| 3.1.5 PDGFBB诱导DNMT1上调进而抑制miR-1281的表达 | 第44-47页 |
| 3.1.6 在低氧刺激的PASMCs、MCT诱导PAH大鼠的肺动脉和CHD-PAH患者的血清中miR-1281表达水平下调 | 第47页 |
| 3.1.7 miR-1281调节肺动脉平滑肌细胞的分子机制模型 | 第47-48页 |
| 3.2 PDGFBB通过上调DNMT1抑制EP300进而调控RPASMC的增殖和迁移 | 第48-57页 |
| 3.2.1 在PASMCs中PDGFBB诱导EP300显著下调 | 第48-50页 |
| 3.2.2 不同细胞中,PDGFBB刺激下EP300的表达情况 | 第50页 |
| 3.2.3 EP300抑制PASMCs的增殖和迁移 | 第50-51页 |
| 3.2.4 在PDGF通路中调控EP300的EGR1不是关键机制 | 第51-52页 |
| 3.2.5 过表达miR-1281并不能调控EP300的表达 | 第52-53页 |
| 3.2.6 敲除CpG岛能上调EP300的表达 | 第53-54页 |
| 3.2.7 在PDGFBB刺激下,5-aza-dc能回复EP300的表达 | 第54-55页 |
| 3.2.8 PDGFBB刺激下PASMC中DNMT家族的表达情况 | 第55-56页 |
| 3.2.9 EP300调节肺动脉平滑肌细胞的分子机制模型 | 第56-57页 |
| 第4章 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 在肺动脉平滑肌细胞的异常增殖中,miR-1281参与调控的信号通路及靶基因 | 第57-58页 |
| 4.2 在PDGF信号通路中,DNMT1在肺动脉高压中的调控机制 | 第58-59页 |
| 4.3 在PDGF信号通路中,参与调控组蛋白乙酰化转移酶EP300的分子机制 | 第59-61页 |
| 第5章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第74页 |
