| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 LaminA蛋白结构及其功能 | 第9-10页 |
| 1.2 LaminA基因突变与疾病 | 第10-12页 |
| 1.3 LaminA磷酸化位点修饰的重要性 | 第12-16页 |
| 第2章 实验材料 | 第16-22页 |
| 2.1 抗体 | 第16页 |
| 2.2 寡核苷酸片段 | 第16-17页 |
| 2.3 载体 | 第17页 |
| 2.4 试剂 | 第17-18页 |
| 2.5 细胞系类型 | 第18页 |
| 2.6 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.7 溶液配制 | 第19-22页 |
| 第3章 实验方法 | 第22-31页 |
| 3.1 小鼠基因组DNA的提取以及基因型PCR鉴定 | 第22页 |
| 3.2 点突变质粒构建 | 第22-24页 |
| 3.3 小鼠胚胎成纤维细胞的制备 | 第24页 |
| 3.4 细胞培养和转染 | 第24-25页 |
| 3.4.1 复苏细胞与培养 | 第24-25页 |
| 3.4.2 细胞传代 | 第25页 |
| 3.4.3 293 T细胞转染 | 第25页 |
| 3.5 蛋白质提取,SDS-PAGE和免疫印迹 | 第25-26页 |
| 3.5.1 从培养的细胞中提取总蛋白质 | 第25页 |
| 3.5.2 SDS-PAGE和免疫印迹 | 第25-26页 |
| 3.6 免疫共沉淀实验 | 第26-27页 |
| 3.7 体外纯化蛋白及激酶实验 | 第27-28页 |
| 3.7.1 构建标签-目的蛋白质粒 | 第27页 |
| 3.7.2 体外激酶孵育 | 第27-28页 |
| 3.8 实时荧光定量核酸分析 | 第28-29页 |
| 3.8.1 抽提RNA | 第28页 |
| 3.8.2 反转录成cDNA | 第28-29页 |
| 3.8.3 实时荧光定量分析 | 第29页 |
| 3.9 衰老相关β-半乳糖苷酶染色实验 | 第29-30页 |
| 3.10 统计分析和图表处理 | 第30-31页 |
| 第4章 结果 | 第31-50页 |
| 4.1 Progerin磷酸化水平低 | 第31-32页 |
| 4.2 点突变载体构建及筛选磷酸化位点 | 第32-35页 |
| 4.3 生物信息学筛选Ser628位点激酶 | 第35-36页 |
| 4.4 GSK3β与laminA存在相互作用 | 第36-37页 |
| 4.5 GSK3β磷酸化laminASer628位点 | 第37-40页 |
| 4.6 CK2α磷酸化Ser636位点 | 第40-42页 |
| 4.7 CK2磷酸化Ser636引发GSK3β磷酸化Ser628位点 | 第42页 |
| 4.8 LMNA~(-/-)MEFs获取与鉴定及点突变细胞系构建 | 第42-44页 |
| 4.9 Ser628、Ser636位点磷酸化影响laminA核内分布 | 第44-45页 |
| 4.10 Ser628、Ser636位点磷酸化导致细胞衰老 | 第45-50页 |
| 第5章 讨论 | 第50-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第61页 |
