| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-29页 |
| 1.1 肺癌研究简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1 肺癌概况、起因及分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 肺癌诊断和治疗 | 第12页 |
| 1.1.3 肺癌诊断标记物的研究 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA研究简介 | 第13-23页 |
| 1.2.1 miRNA的来源及生成机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA的生物学特征及功能 | 第14-16页 |
| 1.2.3 miRNA在肺癌中的应用 | 第16页 |
| 1.2.4 循环miRNA和exosomemiRNA的研究 | 第16-17页 |
| 1.2.5 miRNA的检测技术 | 第17-23页 |
| 1.3 高通量测序技术简介 | 第23-27页 |
| 1.3.1 高通量测序主流平台概况 | 第23-27页 |
| 1.3.2 高通量测序技术在miRNA检测中的应用 | 第27页 |
| 1.4 主要研究内容及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 肺癌患者组织miRNA的表达谱筛选 | 第29-51页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 实验材料与设备 | 第29-31页 |
| 2.2.2 样本处理和miRNA提取 | 第31页 |
| 2.2.3 miRNA文库制备及IonTorrent测序 | 第31-33页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.2.5 定量PCR验证 | 第34-35页 |
| 2.2.6 miRNA原位杂交 | 第35-36页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第36页 |
| 2.3 实验结果分析 | 第36-48页 |
| 2.3.1 肺癌患者组织miRNA总体测序结果 | 第36页 |
| 2.3.2 肺癌患者组织miRNA表达谱的初步筛选 | 第36-39页 |
| 2.3.3 组织中表达水平呈渐进性变化的miRNA筛选 | 第39-40页 |
| 2.3.4 鳞癌与腺癌癌组织间差异表达miRNA筛选 | 第40页 |
| 2.3.5 差异表达miRNA的定量PCR及原位杂交验证 | 第40-43页 |
| 2.3.6 鳞癌中miRNA表达水平与病理参数间关系 | 第43-44页 |
| 2.3.7 差异表达miRNA的靶基因预测和功能富集分析 | 第44-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 肺癌患者血清miRNA的表达谱筛选 | 第51-66页 |
| 3.1 引言 | 第51-52页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第52-59页 |
| 3.2.1 实验材料与设备 | 第52-53页 |
| 3.2.2 样本处理和miRNA提取 | 第53-54页 |
| 3.2.3 miRNA文库制备及Hiseq2500测序 | 第54-57页 |
| 3.2.4 生物信息学分析 | 第57-58页 |
| 3.2.5 miRNA和靶基因定量PCR验证 | 第58-59页 |
| 3.2.6 统计学分析 | 第59页 |
| 3.3 实验结果分析 | 第59-63页 |
| 3.3.1 肺癌患者血清miRNA总体测序结果 | 第59-60页 |
| 3.3.2 肺癌患者血清miRNA表达谱筛选 | 第60-61页 |
| 3.3.3 组织和血清中共同差异表达miRNA的定量PCR验证 | 第61页 |
| 3.3.4 共同差异表达miRNA的靶基因预测 | 第61-62页 |
| 3.3.5 筛选的靶基因定量PCR结果 | 第62-63页 |
| 3.3.6 筛选的靶基因功能富集分析 | 第63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 miR-486-5p抑制肺癌细胞生长的细胞学功能研究 | 第66-88页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第66-77页 |
| 4.2.1 实验材料与设备 | 第66-68页 |
| 4.2.2 细胞培养、RNA提取与定量PCR检测 | 第68-69页 |
| 4.2.3 细胞侵染效率评价 | 第69页 |
| 4.2.4 双荧光素酶报告基因实验 | 第69-70页 |
| 4.2.5 慢病毒载体构建与包装 | 第70-74页 |
| 4.2.6 细胞转染 | 第74-75页 |
| 4.2.7 小RNA干扰和westernblot实验 | 第75页 |
| 4.2.8 细胞增殖、细胞迁移及细胞凋亡实验 | 第75-77页 |
| 4.2.9 生物信息学和统计学分析 | 第77页 |
| 4.3 实验结果分析 | 第77-84页 |
| 4.3.1 miR-486-5p在肺癌组织、血清、细胞及TCGA数据库样本中表达下调 | 第77-78页 |
| 4.3.2 下调的miR-486-5p与非小细胞肺癌分期和肿瘤大小关系 | 第78-79页 |
| 4.3.3 PIK3R1是miR-486-5p的靶基因 | 第79-81页 |
| 4.3.4 miR-486-5p与靶基因PIK3R1的表达水平呈负相关 | 第81页 |
| 4.3.5 细胞侵染效率评价结果 | 第81页 |
| 4.3.6 过表达的miR-486-5p抑制PIK3R1的表达 | 第81-82页 |
| 4.3.7 过表达的miR-486-5p影响A549细胞的增殖、迁移和凋亡 | 第82-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-87页 |
| 4.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 第五章 总结与展望 | 第88-91页 |
| 5.1 全文总结 | 第88-90页 |
| 5.2 论文展望 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
