| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第13-22页 |
| 1.1. 木质纤维素燃料乙醇 | 第13页 |
| 1.2. 酿酒酵母木糖代谢重组菌株的构建 | 第13-15页 |
| 1.2.1 木糖还原酶-木酮糖脱氢酶途径(XR-XDH途径) | 第14-15页 |
| 1.2.2 木糖异构酶途径(XI途径) | 第15页 |
| 1.3. 木糖代谢重组菌株的进化 | 第15-18页 |
| 1.3.1 木糖代谢酿酒酵母菌株理性设计 | 第16-17页 |
| 1.3.2 木糖代谢酿酒酵母菌株非理性的驯化 | 第17-18页 |
| 1.4. 课题组前期工作 | 第18-20页 |
| 1.5. 酿酒酵母菌株ASK10参与的细胞调控 | 第20-21页 |
| 1.5.1 ASK10基因参与细胞渗透压调节 | 第20页 |
| 1.5.2 ASK10基因参与细胞氧化还原压力 | 第20-21页 |
| 1.5.3 ASK10基因参与细胞热激相应 | 第21页 |
| 1.5.4 Ask10p作为RNA聚合酶Ⅱ全酶的组成成分 | 第21页 |
| 1.6. 本论文的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与研究方法 | 第22-42页 |
| 2.1. 实验室仪器与耗材 | 第22页 |
| 2.2. 质粒与菌株 | 第22-26页 |
| 2.3. 引物 | 第26-30页 |
| 2.4. 实验技术与方法 | 第30-42页 |
| 2.4.1. DNA扩增纯化和测序 | 第30页 |
| 2.4.2. Gibson Assembly | 第30-31页 |
| 2.4.3. 大肠杆菌转化 | 第31页 |
| 2.4.4. 大肠杆菌质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.4.5. 酵母转化 | 第32页 |
| 2.4.6. 酵母质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.4.7. 酵母染色体提取 | 第33页 |
| 2.4.8. 基因敲除 | 第33-34页 |
| 2.4.9. 基因原位突变 | 第34-35页 |
| 2.4.10. 酵母总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.4.11. RNA反转录和荧光定量PCR | 第36页 |
| 2.4.12. 点滴平板实验 | 第36-37页 |
| 2.4.13. XR-XDH酶活测定 | 第37页 |
| 2.4.14. XI的酶活测定 | 第37-38页 |
| 2.4.15. LacZ的酶活测定 | 第38-39页 |
| 2.4.16. 细胞GFP荧光检测 | 第39页 |
| 2.4.17. SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 2.4.18. Western-Blot实验 | 第40-41页 |
| 2.4.19. 基因组测序与数据分析 | 第41页 |
| 2.4.20. 转录组检测与数据分析 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-59页 |
| 3.1. 增强酿酒酵母菌株木糖代谢能力的突变基因的筛选 | 第42-45页 |
| 3.1.1. 背景菌株的选择 | 第42页 |
| 3.1.2. 突变基因菌株的构建 | 第42页 |
| 3.1.3. 木糖点滴平板实验 | 第42-45页 |
| 3.2. ASK10~(M475R)原位突变对Ask10p功能完整性的影响 | 第45-47页 |
| 3.3. ASK10基因的敲除及ASK10~(M475R)原位突变提高菌株的木糖生长能力 | 第47-48页 |
| 3.4. ASK10敲除及突变增强菌株木糖代谢能力机制的研究 | 第48-53页 |
| 3.4.1. ask10△及ASK10~(M475R)原位突变菌株中木糖异构酶酶活测定 | 第48-49页 |
| 3.4.2. ask10△及ASK10~(M475R)原位突变菌株中xylA和TEF1基因转录水平测定 | 第49-50页 |
| 3.4.3. ask10△及ASK10~(M475R)原位突变菌株xylA基因拷贝数测定 | 第50页 |
| 3.4.4. ask10△及ASK10~(M475R)原位突变菌株对报告基因LacZ和GFP的影响 | 第50-53页 |
| 3.5. 转录组分析 | 第53-57页 |
| 3.5.1. 测序结果质量评估 | 第53-54页 |
| 3.5.2. 差异基因比对分析 | 第54-57页 |
| 3.6. 分子伴侣HSP26p对菌株木糖代谢的影响 | 第57-59页 |
| 3.6.1. HSP26超表达相关菌株木糖异构酶酶活 | 第57页 |
| 3.6.2. HSP26超表达相关菌株生长实验 | 第57-59页 |
| 总结与讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附件 | 第66页 |
