| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 引言 | 第9-22页 |
| 1.1 基因表达概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 基因表达 | 第9页 |
| 1.1.2 基因表达与疾病的关系 | 第9-10页 |
| 1.2 基因表达调控现有技术 | 第10-14页 |
| 1.2.1 反义技术 | 第10-11页 |
| 1.2.1.1 反义技术作用机理 | 第10-11页 |
| 1.2.1.2 反义技术的应用 | 第11页 |
| 1.2.2 RNAi技术 | 第11-12页 |
| 1.2.2.1 RNAi的作用机理 | 第11-12页 |
| 1.2.2.2 RNAi的研究现状 | 第12页 |
| 1.2.3 基因组编辑技术 | 第12-14页 |
| 1.2.3.1 ZFN技术 | 第12-13页 |
| 1.2.3.2 TALEN技术 | 第13页 |
| 1.2.3.3 CRISPR技术 | 第13-14页 |
| 1.2.3.4 基因组编辑技术比较 | 第14页 |
| 1.3 荧光定量PCR检测技术 | 第14-18页 |
| 1.3.1 荧光定量PCR定义 | 第15页 |
| 1.3.2 荧光定量PCR定量原理 | 第15-16页 |
| 1.3.3 荧光定量PCR定量方式 | 第16-17页 |
| 1.3.4 荧光定量PCR定量方法 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.5 研究内容 | 第19-21页 |
| 1.6 研究特色及创新性 | 第21-22页 |
| 第二章 验证细胞内ATG4C基因的表达 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 细胞系与试剂药品 | 第22-23页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第24页 |
| 2.2.1.3 细胞冻存 | 第24-25页 |
| 2.2.2 验证细胞内ATG4C基因的表达 | 第25-29页 |
| 2.2.2.1 细胞RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 目的基因ATG4C及内参基因ACTB引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 PCR验证基因的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.3 qPCR检测引物扩增效率及相关性 | 第29-35页 |
| 2.2.3.1 PCR扩增ATG4C及ACTB基因片段 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 PCR产物纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3.3 重组质粒的制备及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.3.4 qPCR验证 | 第33-35页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第35-46页 |
| 2.3.1 细胞培养结果 | 第35-37页 |
| 2.3.2 验证细胞内ATG4C基因的表达 | 第37-39页 |
| 2.3.2.1 细胞RNA浓度及纯度测定 | 第37-38页 |
| 2.3.2.2 PCR验证基因的表达 | 第38-39页 |
| 2.3.3 qPCR检测引物扩增效率及相关性 | 第39-46页 |
| 2.3.3.1 PCR产物纯化 | 第39页 |
| 2.3.3.2 重组质粒的制备及鉴定 | 第39-42页 |
| 2.3.3.3 qPCR结果与分析 | 第42-46页 |
| 第三章 设计探针竞争性干扰基因表达 | 第46-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 细胞系与试剂药品 | 第46页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-53页 |
| 3.2.1 ATG4C探针设计及验证 | 第47-50页 |
| 3.2.1.1 HELA基因组提取与验证 | 第48-49页 |
| 3.2.1.2 PCR验证ATG4C-CY3探针序列存在HELA基因组上 | 第49-50页 |
| 3.2.1.3 HELA基因组PCR产物鉴定 | 第50页 |
| 3.2.2 探针序列退火 | 第50-51页 |
| 3.2.2.1 退火体系配制 | 第50-51页 |
| 3.2.3 探针纯化及Cy3标记 | 第51-52页 |
| 3.2.3.1 探针纯化流程 | 第51页 |
| 3.2.3.2 探针Cy3染料标记后PBS溶解 | 第51-52页 |
| 3.2.4 探针导入HELA细胞 | 第52-53页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第53-59页 |
| 3.3.1 ATG4C探针设计及验证 | 第53-55页 |
| 3.3.1.1 HELA基因组提取结果 | 第53页 |
| 3.3.1.2 HELA基因组PCR产物鉴定 | 第53-55页 |
| 3.3.2 电泳验证探针序列退火结果 | 第55-56页 |
| 3.3.3 探针纯化后Cy3标记结果 | 第56页 |
| 3.3.4 探针导入HELA细胞状态观察 | 第56-59页 |
| 第四章 检测基因表达差异 | 第59-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 4.1.1 细胞系与试剂药品 | 第59页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第59-60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-64页 |
| 4.2.1 调控后细胞总RNA提取 | 第60页 |
| 4.2.2 RNA去基因组污染处理 | 第60-61页 |
| 4.2.3 第一链cDNA合成 | 第61页 |
| 4.2.4 qPCR检测基因表达差异 | 第61-64页 |
| 4.2.4.1 加样模块设计方案 | 第62-63页 |
| 4.2.4.2 qPCR体系配制与运行程序设置 | 第63-64页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第64-69页 |
| 4.3.1 调控后细胞总RNA提取结果 | 第64-65页 |
| 4.3.2 qPCR检测ATG4C基因的差异表达结果与分析 | 第65-69页 |
| 结论与展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第78页 |
