| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-17页 |
| 0.1 禽流感概述 | 第11-13页 |
| 0.1.1 禽流感的传播 | 第11-12页 |
| 0.1.2 禽流感病毒的结构及组成 | 第12-13页 |
| 0.2 NS1蛋白的简介 | 第13-14页 |
| 0.3 NOLC1蛋白的简介 | 第14-15页 |
| 0.4 研究NOLC1蛋白与NS1相互作用的意义 | 第15页 |
| 0.5 本项目研究目的、内容及意义 | 第15-17页 |
| 第一章 NS1双点突变表达载体的构建和表达 | 第17-24页 |
| 1.1 前言 | 第17页 |
| 1.2 材料 | 第17-18页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第17页 |
| 1.2.2 细胞株、载体、细菌菌株 | 第17-18页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第18页 |
| 1.2.4 溶液配制(见附录A) | 第18页 |
| 1.2.5 主要仪器及耗材(见附录B) | 第18页 |
| 1.3 方法 | 第18-21页 |
| 1.3.1 NS1(120D/195R)真核表达载体的构建及截短蛋白的表达 | 第18-21页 |
| 1.4 结果 | 第21-23页 |
| 1.4.1 GFP-NS1(120D/195R)双点突变体的鉴定 | 第21页 |
| 1.4.2 pEGFP-N1-NS1蛋白(及各个突变)真核表达载体在COS-7细胞中的表达 | 第21-23页 |
| 1.5 讨论 | 第23-24页 |
| 第二章 NS1-NOLC1相互作用关键氨基酸位点协同作用分析 | 第24-30页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料 | 第24-25页 |
| 2.2.1 细胞株、载体、细菌菌株 | 第24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 溶液配制(见附录A) | 第25页 |
| 2.2.4 主要仪器及耗材(见附录B) | 第25页 |
| 2.3 方法 | 第25-26页 |
| 2.3.1 NS1及各蛋白突变体的表达 | 第25页 |
| 2.3.2 His-NOLC1蛋白原核表达及纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 His-pull down体外检测蛋白间相互作用 | 第26页 |
| 2.4 结果 | 第26-29页 |
| 2.4.1 NOLC1的表达及纯化验证 | 第26-27页 |
| 2.4.2 His-pull down的特异性检测 | 第27-28页 |
| 2.4.3 NS1突变蛋白与NOLC1蛋白相互作用His-pull down检测 | 第28-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 NS1-NOLC1相互作用对宿主细胞凋亡的影响 | 第30-37页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 材料 | 第30-31页 |
| 3.2.1 细胞株、载体、细菌菌株 | 第30-31页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.2.3 溶液配制(见附录A) | 第31页 |
| 3.2.4 主要仪器及耗材(见附录B) | 第31页 |
| 3.3 方法 | 第31-32页 |
| 3.3.1 Hoechst33342染色定性检测细胞凋亡 | 第31页 |
| 3.3.2 Annexin V-APC/PI双染法流式细胞仪定量检测细胞凋亡 | 第31-32页 |
| 3.4 结果 | 第32-35页 |
| 3.4.1 Hoechst33342染色定性检测细胞凋亡 | 第32-33页 |
| 3.4.2 Annexin V-APC/PI双染法流式细胞仪定量检测细胞凋亡 | 第33-35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 结论与展望 | 第37-39页 |
| 4.1 结论 | 第37页 |
| 4.2 展望 | 第37-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录A 试剂及其配制一览表 | 第44-47页 |
| 附录B 主要仪器与耗材一览表 | 第47-49页 |
| 附录C 重组质粒目的片段的序列信息Blast结果 | 第49-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第50-51页 |
