| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-9页 |
| 缩略词中英文对照 | 第14-15页 |
| 第1章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 糖尿病、高胰岛素血症与乳腺癌 | 第15-16页 |
| 1.2 胰岛素促进乳腺癌生长的机制 | 第16-18页 |
| 1.3 miR-29a参与胰岛素信号通路调控乳腺癌生长侵袭的可能性 | 第18-20页 |
| 1.4 研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 高胰岛素水平培养乳腺癌细胞的生长增殖及miR-29a表达 | 第21-34页 |
| 2.1 前言 | 第21-23页 |
| 2.2 材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第23页 |
| 2.2.2 乳腺癌组织标本 | 第23页 |
| 2.2.3 实验主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 实验主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 乳腺癌细胞的培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2 人胰岛素对乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.3 流式细胞仪检测细胞周期 | 第27页 |
| 2.3.4 Trizol法提取细胞总RNA与鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 实时定量PCR | 第28-29页 |
| 2.3.6 统计学处理 | 第29页 |
| 2.4 结果 | 第29-31页 |
| 2.4.1 最佳胰岛素浓度 | 第29-30页 |
| 2.4.2 最佳作用时间 | 第30页 |
| 2.4.3 流式细胞仪检测细胞周期 | 第30页 |
| 2.4.4 qRT-PCR检测乳腺癌miR-29a表达 | 第30-31页 |
| 2.5 结论 | 第31-32页 |
| 附图 | 第32-34页 |
| 第3章 miR-29a参与胰岛素信号通路调控乳腺癌生长侵袭的分子机制 | 第34-52页 |
| 3.1 前言 | 第34-37页 |
| 3.1.1 胰岛素信号通路与乳腺癌 | 第34-36页 |
| 3.1.2 miR-29a靶基因及参与调控的信号通路 | 第36-37页 |
| 3.2 材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第37-38页 |
| 3.2.2 主要试剂及抗体 | 第38-40页 |
| 3.2.3 主要设备 | 第40页 |
| 3.3 主要实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 设计miR-29a的minics和inhabitor | 第40-41页 |
| 3.3.2 miR-29a细胞转染 | 第41页 |
| 3.3.3 CCK-8法检测细胞增殖 | 第41-42页 |
| 3.3.4 Western印迹 | 第42-44页 |
| 3.3.5 实时定量PCR | 第44-45页 |
| 3.3.6 Transwell侵袭实验 | 第45页 |
| 3.3.7 特异性siRNA的细胞转染 | 第45-46页 |
| 3.3.8 统计学分析 | 第46页 |
| 3.4 结果 | 第46-48页 |
| 3.4.1 干扰miR-29a对胰岛素培养乳腺癌细胞生长增殖影响 | 第46页 |
| 3.4.2 胰岛素对乳腺癌细胞胰岛素信号通路的影响 | 第46页 |
| 3.4.3 干扰miR-29a对乳腺癌细胞胰岛素信号通路的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4 siRNA干扰IGF-1R、CDC42、P85α后,乳腺癌细胞miR-29a的表达 | 第47页 |
| 3.4.5 miR-29a对乳腺癌细胞MCF-7的侵袭影响 | 第47-48页 |
| 3.5 结论 | 第48-49页 |
| 附图 | 第49-52页 |
| 第4章 miR-29a的乳腺癌生物治疗靶点作用 | 第52-63页 |
| 4.1 前言 | 第52-53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 细胞株 | 第53页 |
| 4.2.2 工程菌 | 第53页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.4 实验动物 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-58页 |
| 4.3.1 质粒扩增及提取 | 第54-56页 |
| 4.3.2 病毒包装 | 第56页 |
| 4.3.3 病毒滴度测定 | 第56-57页 |
| 4.3.4 构建抑制miR-29a表达稳转细胞系 | 第57页 |
| 4.3.5 糖尿病荷瘤鼠模型建立 | 第57-58页 |
| 4.4 结果 | 第58-59页 |
| 4.4.1 检测高糖、高胰岛素培养下MCF-7细胞的增殖及miR-29a表达 | 第58页 |
| 4.4.2 荧光显微镜下观察转染效率 | 第58页 |
| 4.4.3 检测转染anti-miR-29a和空白载体后乳腺癌MCF-7细胞miR-29a表达 | 第58页 |
| 4.4.4 转染anti-miR-29a病毒载体和空白载体后高糖、胰岛素培养乳腺癌MCF-7细胞生长增殖情况 | 第58-59页 |
| 4.4.5 转染anti-miR-29a病毒载体和空白载体后乳腺癌MCF-7细胞侵袭情况 | 第59页 |
| 4.4.6 抑制乳腺癌MCF-7细胞miR-29a表达,糖尿病荷瘤鼠的成瘤情况 | 第59页 |
| 4.5 结论 | 第59-60页 |
| 附图 | 第60-63页 |
| 第5章 讨论 | 第63-68页 |
| 第6章 全文结论与展望 | 第68-69页 |
| 6.1 全文结论 | 第68页 |
| 6.2 展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第77-78页 |
| 综述 | 第78-84页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
