| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-46页 |
| 1.1 2-氯烟酸的概述 | 第16-24页 |
| 1.1.1 2-氯烟酸的用途 | 第16-20页 |
| 1.1.2 2-氯烟酸的合成工艺 | 第20-24页 |
| 1.2 腈水合酶 | 第24-28页 |
| 1.2.1 腈水合酶的来源 | 第25页 |
| 1.2.2 腈水合酶的结构和催化性质 | 第25-27页 |
| 1.2.3 腈水合酶的基因克隆 | 第27-28页 |
| 1.3 酰胺酶 | 第28-35页 |
| 1.3.1 酰胺酶的来源 | 第29-30页 |
| 1.3.2 酰胺酶的分类 | 第30-31页 |
| 1.3.3 酰胺酶的结构及催化机理 | 第31-35页 |
| 1.4 本论文的研究内容 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-46页 |
| 第二章 腈水合酶基因的克隆及表达 | 第46-68页 |
| 2.1 引言 | 第46-47页 |
| 2.2 材料与方法 | 第47-57页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及培养基 | 第47-48页 |
| 2.2.2 工具酶及试剂 | 第48-49页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第49页 |
| 2.2.4 野生型菌株培养与选择 | 第49页 |
| 2.2.5 分析方法 | 第49-51页 |
| 2.2.6 腈水合酶基因的克隆 | 第51-53页 |
| 2.2.7 质粒提取与转化 | 第53-54页 |
| 2.2.8 腈水合酶基因的表达 | 第54-57页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 2.3.1 产腈水合酶菌株的选择 | 第57-58页 |
| 2.3.2 腈水合酶基因的克隆 | 第58-61页 |
| 2.3.3 腈水合酶基因的表达 | 第61-64页 |
| 2.3.4 酶活测定 | 第64页 |
| 2.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-68页 |
| 第三章 腈水合酶的诱导条件优化及其催化2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酰胺 | 第68-86页 |
| 3.1 引言 | 第68-69页 |
| 3.2 材料与方法 | 第69-72页 |
| 3.2.1 菌株和培养基 | 第69页 |
| 3.2.2 菌体培养及酶活分析 | 第69-70页 |
| 3.2.3 腈水合酶的诱导表达条件优化 | 第70页 |
| 3.2.4 重组腈水合酶催化2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酰胺 | 第70-72页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第72-84页 |
| 3.3.1 产腈水合酶诱导条件的优化 | 第72-75页 |
| 3.3.2 转化pH对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第75-76页 |
| 3.3.3 转化温度对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第76-79页 |
| 3.3.4 金属离子对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.5 底物浓度对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第80-81页 |
| 3.3.6 产物浓度对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第81-82页 |
| 3.3.7 催化剂用量对2-氯烟酰胺合成的影响 | 第82-83页 |
| 3.3.8 腈水合酶酶促反应动力学 | 第83-84页 |
| 3.4 本章小结 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 第四章 产酰胺酶菌株培养条件的优化 | 第86-104页 |
| 4.1 引言 | 第86-87页 |
| 4.2 材料与方法 | 第87-90页 |
| 4.2.1 菌株和培养基 | 第87-88页 |
| 4.2.2 产酰胺酶菌株的培养 | 第88页 |
| 4.2.3 分析与检测 | 第88-89页 |
| 4.2.4 产酰胺酶菌株培养条件的研究 | 第89-90页 |
| 4.2.5 响应面实验设计 | 第90页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第90-101页 |
| 4.3.1 酰胺酶酶源的选择 | 第90-91页 |
| 4.3.2 产酰胺酶菌株培养条件的研究 | 第91-96页 |
| 4.3.3 响应面法优化酰胺酶的诱导表达条件 | 第96-101页 |
| 4.4 本章小结 | 第101页 |
| 参考文献 | 第101-104页 |
| 第五章 重组酰胺酶的酶学特性及其催化2-氯烟酰胺制备2-氯烟酸 | 第104-126页 |
| 5.1 引言 | 第104-105页 |
| 5.2 材料与方法 | 第105-108页 |
| 5.2.1 菌株和试剂 | 第105页 |
| 5.2.2 酰胺酶的分离纯化 | 第105页 |
| 5.2.3 分析方法 | 第105-106页 |
| 5.2.4 酰胺酶酶学性质的研究 | 第106-107页 |
| 5.2.5 重组酰胺酶催化2-氯烟酰胺制备2-氯烟酸 | 第107-108页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第108-122页 |
| 5.3.1 酰胺酶的分离纯化 | 第108-109页 |
| 5.3.2 酰胺酶酶学性质的研究 | 第109-115页 |
| 5.3.3 同源建模及分子对接 | 第115-118页 |
| 5.3.4 底物浓度对2-氯烟酸制备的影响 | 第118-120页 |
| 5.3.5 E.coli BL21 (DE3)/pET-28b(+)-AMI静息细胞的重复使用批次 | 第120-121页 |
| 5.3.6 酶促反应动力学 | 第121-122页 |
| 5.4 本章小结 | 第122页 |
| 参考文献 | 第122-126页 |
| 第六章 双酶耦合催化水解2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酸 | 第126-146页 |
| 6.1 引言 | 第126-127页 |
| 6.2 材料和方法 | 第127-131页 |
| 6.2.1 菌株、培养基及培养方法 | 第127页 |
| 6.2.2 分析方法 | 第127-128页 |
| 6.2.3 双酶双菌耦合同步控制反应的研究 | 第128-129页 |
| 6.2.4 双酶双菌耦合分步控制反应的研究 | 第129页 |
| 6.2.5 共表达腈水合酶和酰胺酶重组菌的构建及其催化制备2-氯烟酸 | 第129-131页 |
| 6.3 结果和讨论 | 第131-142页 |
| 6.3.1 双酶双菌耦合催化制备2-氯烟酸的反应机理 | 第131页 |
| 6.3.2 转化pH对双菌耦合催化反应的影响 | 第131-132页 |
| 6.3.3 双菌质量比对耦合催化反应的影响 | 第132-133页 |
| 6.3.4 反应温度对双菌耦合催化反应的影响 | 第133-134页 |
| 6.3.5 反应转速对双菌耦合催化反应的影响 | 第134-135页 |
| 6.3.6 底物浓度对双菌耦合催化反应的影响 | 第135-136页 |
| 6.3.7 双酶双菌耦合催化制备2-氯烟酸的反应进程 | 第136-137页 |
| 6.3.8 腈水合酶和酰胺酶共表达的SDS-PAGE图 | 第137-138页 |
| 6.3.9 诱导剂浓度对双酶共表达活力的影响 | 第138-139页 |
| 6.3.10 诱导温度对双酶共表达活力的影响 | 第139页 |
| 6.3.11 诱导时间对双酶共表达活力的影响 | 第139-140页 |
| 6.3.12 转化温度对一菌双酶耦合催化的影响 | 第140-141页 |
| 6.3.13 转化pH对一菌双酶耦合催化的影响 | 第141-142页 |
| 6.3.14 一菌双酶催化制备2-氯烟酸的反应进程 | 第142页 |
| 6.4 本章小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-146页 |
| 第七章 结论与展望 | 第146-150页 |
| 7.1 结论 | 第146-148页 |
| 7.2 展望 | 第148-150页 |
| 攻读博士期间发表论文与申请专利 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152页 |
