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生物催化水解2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酸的研究

摘要第4-8页
ABSTRACT第8-11页
符号说明第15-16页
第一章 绪论第16-46页
    1.1 2-氯烟酸的概述第16-24页
        1.1.1 2-氯烟酸的用途第16-20页
        1.1.2 2-氯烟酸的合成工艺第20-24页
    1.2 腈水合酶第24-28页
        1.2.1 腈水合酶的来源第25页
        1.2.2 腈水合酶的结构和催化性质第25-27页
        1.2.3 腈水合酶的基因克隆第27-28页
    1.3 酰胺酶第28-35页
        1.3.1 酰胺酶的来源第29-30页
        1.3.2 酰胺酶的分类第30-31页
        1.3.3 酰胺酶的结构及催化机理第31-35页
    1.4 本论文的研究内容第35-36页
    参考文献第36-46页
第二章 腈水合酶基因的克隆及表达第46-68页
    2.1 引言第46-47页
    2.2 材料与方法第47-57页
        2.2.1 菌株、质粒及培养基第47-48页
        2.2.2 工具酶及试剂第48-49页
        2.2.3 主要仪器第49页
        2.2.4 野生型菌株培养与选择第49页
        2.2.5 分析方法第49-51页
        2.2.6 腈水合酶基因的克隆第51-53页
        2.2.7 质粒提取与转化第53-54页
        2.2.8 腈水合酶基因的表达第54-57页
    2.3 结果与讨论第57-64页
        2.3.1 产腈水合酶菌株的选择第57-58页
        2.3.2 腈水合酶基因的克隆第58-61页
        2.3.3 腈水合酶基因的表达第61-64页
        2.3.4 酶活测定第64页
    2.4 本章小结第64-65页
    参考文献第65-68页
第三章 腈水合酶的诱导条件优化及其催化2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酰胺第68-86页
    3.1 引言第68-69页
    3.2 材料与方法第69-72页
        3.2.1 菌株和培养基第69页
        3.2.2 菌体培养及酶活分析第69-70页
        3.2.3 腈水合酶的诱导表达条件优化第70页
        3.2.4 重组腈水合酶催化2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酰胺第70-72页
    3.3 结果与讨论第72-84页
        3.3.1 产腈水合酶诱导条件的优化第72-75页
        3.3.2 转化pH对2-氯烟酰胺合成的影响第75-76页
        3.3.3 转化温度对2-氯烟酰胺合成的影响第76-79页
        3.3.4 金属离子对2-氯烟酰胺合成的影响第79-80页
        3.3.5 底物浓度对2-氯烟酰胺合成的影响第80-81页
        3.3.6 产物浓度对2-氯烟酰胺合成的影响第81-82页
        3.3.7 催化剂用量对2-氯烟酰胺合成的影响第82-83页
        3.3.8 腈水合酶酶促反应动力学第83-84页
    3.4 本章小结第84页
    参考文献第84-86页
第四章 产酰胺酶菌株培养条件的优化第86-104页
    4.1 引言第86-87页
    4.2 材料与方法第87-90页
        4.2.1 菌株和培养基第87-88页
        4.2.2 产酰胺酶菌株的培养第88页
        4.2.3 分析与检测第88-89页
        4.2.4 产酰胺酶菌株培养条件的研究第89-90页
        4.2.5 响应面实验设计第90页
    4.3 结果与讨论第90-101页
        4.3.1 酰胺酶酶源的选择第90-91页
        4.3.2 产酰胺酶菌株培养条件的研究第91-96页
        4.3.3 响应面法优化酰胺酶的诱导表达条件第96-101页
    4.4 本章小结第101页
    参考文献第101-104页
第五章 重组酰胺酶的酶学特性及其催化2-氯烟酰胺制备2-氯烟酸第104-126页
    5.1 引言第104-105页
    5.2 材料与方法第105-108页
        5.2.1 菌株和试剂第105页
        5.2.2 酰胺酶的分离纯化第105页
        5.2.3 分析方法第105-106页
        5.2.4 酰胺酶酶学性质的研究第106-107页
        5.2.5 重组酰胺酶催化2-氯烟酰胺制备2-氯烟酸第107-108页
    5.3 结果与讨论第108-122页
        5.3.1 酰胺酶的分离纯化第108-109页
        5.3.2 酰胺酶酶学性质的研究第109-115页
        5.3.3 同源建模及分子对接第115-118页
        5.3.4 底物浓度对2-氯烟酸制备的影响第118-120页
        5.3.5 E.coli BL21 (DE3)/pET-28b(+)-AMI静息细胞的重复使用批次第120-121页
        5.3.6 酶促反应动力学第121-122页
    5.4 本章小结第122页
    参考文献第122-126页
第六章 双酶耦合催化水解2-氯-3-氰基吡啶制备2-氯烟酸第126-146页
    6.1 引言第126-127页
    6.2 材料和方法第127-131页
        6.2.1 菌株、培养基及培养方法第127页
        6.2.2 分析方法第127-128页
        6.2.3 双酶双菌耦合同步控制反应的研究第128-129页
        6.2.4 双酶双菌耦合分步控制反应的研究第129页
        6.2.5 共表达腈水合酶和酰胺酶重组菌的构建及其催化制备2-氯烟酸第129-131页
    6.3 结果和讨论第131-142页
        6.3.1 双酶双菌耦合催化制备2-氯烟酸的反应机理第131页
        6.3.2 转化pH对双菌耦合催化反应的影响第131-132页
        6.3.3 双菌质量比对耦合催化反应的影响第132-133页
        6.3.4 反应温度对双菌耦合催化反应的影响第133-134页
        6.3.5 反应转速对双菌耦合催化反应的影响第134-135页
        6.3.6 底物浓度对双菌耦合催化反应的影响第135-136页
        6.3.7 双酶双菌耦合催化制备2-氯烟酸的反应进程第136-137页
        6.3.8 腈水合酶和酰胺酶共表达的SDS-PAGE图第137-138页
        6.3.9 诱导剂浓度对双酶共表达活力的影响第138-139页
        6.3.10 诱导温度对双酶共表达活力的影响第139页
        6.3.11 诱导时间对双酶共表达活力的影响第139-140页
        6.3.12 转化温度对一菌双酶耦合催化的影响第140-141页
        6.3.13 转化pH对一菌双酶耦合催化的影响第141-142页
        6.3.14 一菌双酶催化制备2-氯烟酸的反应进程第142页
    6.4 本章小结第142-143页
    参考文献第143-146页
第七章 结论与展望第146-150页
    7.1 结论第146-148页
    7.2 展望第148-150页
攻读博士期间发表论文与申请专利第150-152页
致谢第152页

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