| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 骨质疏松症的遗传学 | 第13-17页 |
| 1.1.1 骨生物学 | 第13-14页 |
| 1.1.2 骨质疏松症 | 第14-15页 |
| 1.1.3 骨质疏松症的遗传学研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 骨质疏松症相关新基因的功能研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 Wnt16基因 | 第17页 |
| 1.2.2 Lgr4基因 | 第17页 |
| 1.2.3 En1基因 | 第17页 |
| 1.2.4 Usf3基因 | 第17-18页 |
| 1.3 miRNA与骨分化 | 第18-21页 |
| 1.3.1 miRNA | 第18-19页 |
| 1.3.2 miRNA结合位点多态性 | 第19页 |
| 1.3.3 与骨分化有关的miRNA | 第19-21页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 主要实验设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 生化试剂及试剂盒 | 第23-26页 |
| 2.1.3 菌株及细胞株 | 第26页 |
| 2.1.4 在线预测工具 | 第26-27页 |
| 2.1.5 引物序列及其他寡核苷酸序列 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 培养细胞 | 第30页 |
| 2.2.2 细胞基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 构建重组载体 | 第30-31页 |
| 2.2.4 无内毒素质粒的提取 | 第31页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第31页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因检测 | 第31-32页 |
| 2.2.7 建立U-20S细胞稳转株 | 第32页 |
| 2.2.8 提取细胞总RNA | 第32页 |
| 2.2.9 RNA的逆转录 | 第32-33页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第33页 |
| 2.2.11 转染miRNA抑制剂及模拟物 | 第33页 |
| 2.2.12 茜素红染色(定性/定量) | 第33-34页 |
| 2.2.13 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定 | 第34页 |
| 2.2.14 Western Blot免疫印迹杂交 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-57页 |
| 3.1 骨质疏松症GWAS关联SNP对miRNA结合的影响分析 | 第35-42页 |
| 3.1.1 生物信息学预测分析 | 第35页 |
| 3.1.2 rs1026364 (C/A)影响miR-345-5p与Usf3结合的实验验证 | 第35-41页 |
| 3.1.3 rs884205 (A/C)影响miR-3658与Rank结合的实验验证 | 第41-42页 |
| 3.2 miR-345-5p在成骨分化中的功能分析 | 第42-46页 |
| 3.2.1 U-20S细胞中过表达has-miR-345-5p对成骨分化的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.2 U-20S细胞中抑制has-miR-345-5p对成骨分化的影响 | 第44-46页 |
| 3.3 miR-345所调控靶基因的预测与验证 | 第46-52页 |
| 3.3.1 生物信息学软件预测miR-345的靶基因 | 第46-47页 |
| 3.3.2 细胞外源基因与miR-345的相互作用 | 第47-51页 |
| 3.3.3 细胞内源基因与miR-345生物相互作用 | 第51-52页 |
| 3.4 探索Usf3在成骨分化中的功能 | 第52-57页 |
| 3.4.1 USF3蛋白在多物种中的同源物检索及分析 | 第52-54页 |
| 3.4.2 U-20S细胞中Usf3敲降系统的建立 | 第54页 |
| 3.4.3 敲降Usf3成骨分化标志基因Runx2、Osterix和Alp的表达 | 第54-55页 |
| 3.4.4 Usf3通过结合E-box调控元件调控Runx2启动子的转录活性 | 第55页 |
| 3.4.5 Twist1协同Tcf12调控Runx2启动子的转录活性 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 rs1026364/miR-345-5p/Usf3与骨质疏松 | 第57-58页 |
| 4.2 miR-345对报告基因转录活性的上调作用 | 第58-59页 |
| 4.3 Usf3的功能 | 第59-60页 |
| 4.4 Usf3基因的进化 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 攻读学位期间发表的论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
