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GWAS SNP rs1026364/miR-345-5p/Usf3在骨质疏松中的功能和作用机制研究

摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第一章 前言第13-22页
    1.1 骨质疏松症的遗传学第13-17页
        1.1.1 骨生物学第13-14页
        1.1.2 骨质疏松症第14-15页
        1.1.3 骨质疏松症的遗传学研究进展第15-17页
    1.2 骨质疏松症相关新基因的功能研究进展第17-18页
        1.2.1 Wnt16基因第17页
        1.2.2 Lgr4基因第17页
        1.2.3 En1基因第17页
        1.2.4 Usf3基因第17-18页
    1.3 miRNA与骨分化第18-21页
        1.3.1 miRNA第18-19页
        1.3.2 miRNA结合位点多态性第19页
        1.3.3 与骨分化有关的miRNA第19-21页
    1.4 本研究的目的与意义第21-22页
第二章 材料与方法第22-35页
    2.1 材料第22-30页
        2.1.1 主要实验设备第22-23页
        2.1.2 生化试剂及试剂盒第23-26页
        2.1.3 菌株及细胞株第26页
        2.1.4 在线预测工具第26-27页
        2.1.5 引物序列及其他寡核苷酸序列第27-30页
    2.2 实验方法第30-35页
        2.2.1 培养细胞第30页
        2.2.2 细胞基因组DNA的提取第30页
        2.2.3 构建重组载体第30-31页
        2.2.4 无内毒素质粒的提取第31页
        2.2.5 细胞转染第31页
        2.2.6 双荧光素酶报告基因检测第31-32页
        2.2.7 建立U-20S细胞稳转株第32页
        2.2.8 提取细胞总RNA第32页
        2.2.9 RNA的逆转录第32-33页
        2.2.10 荧光定量PCR第33页
        2.2.11 转染miRNA抑制剂及模拟物第33页
        2.2.12 茜素红染色(定性/定量)第33-34页
        2.2.13 碱性磷酸酶(ALP)活性的测定第34页
        2.2.14 Western Blot免疫印迹杂交第34-35页
第三章 结果与分析第35-57页
    3.1 骨质疏松症GWAS关联SNP对miRNA结合的影响分析第35-42页
        3.1.1 生物信息学预测分析第35页
        3.1.2 rs1026364 (C/A)影响miR-345-5p与Usf3结合的实验验证第35-41页
        3.1.3 rs884205 (A/C)影响miR-3658与Rank结合的实验验证第41-42页
    3.2 miR-345-5p在成骨分化中的功能分析第42-46页
        3.2.1 U-20S细胞中过表达has-miR-345-5p对成骨分化的影响第42-44页
        3.2.2 U-20S细胞中抑制has-miR-345-5p对成骨分化的影响第44-46页
    3.3 miR-345所调控靶基因的预测与验证第46-52页
        3.3.1 生物信息学软件预测miR-345的靶基因第46-47页
        3.3.2 细胞外源基因与miR-345的相互作用第47-51页
        3.3.3 细胞内源基因与miR-345生物相互作用第51-52页
    3.4 探索Usf3在成骨分化中的功能第52-57页
        3.4.1 USF3蛋白在多物种中的同源物检索及分析第52-54页
        3.4.2 U-20S细胞中Usf3敲降系统的建立第54页
        3.4.3 敲降Usf3成骨分化标志基因Runx2、Osterix和Alp的表达第54-55页
        3.4.4 Usf3通过结合E-box调控元件调控Runx2启动子的转录活性第55页
        3.4.5 Twist1协同Tcf12调控Runx2启动子的转录活性第55-57页
第四章 讨论第57-61页
    4.1 rs1026364/miR-345-5p/Usf3与骨质疏松第57-58页
    4.2 miR-345对报告基因转录活性的上调作用第58-59页
    4.3 Usf3的功能第59-60页
    4.4 Usf3基因的进化第60-61页
参考文献第61-73页
攻读学位期间发表的论文情况第73-74页
致谢第74页

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