| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写表及基因符号说明 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 4-羟基异亮氨酸简介 | 第11页 |
| 1.1.1 4-羟基异亮氨酸的立体构型 | 第11页 |
| 1.1.2 4-HIL的理化性质 | 第11页 |
| 1.2 4-羟基异亮氨酸的功能 | 第11-12页 |
| 1.3 4-羟基异亮氨酸的生产方法 | 第12-14页 |
| 1.3.1 提取法 | 第12页 |
| 1.3.2 化学合成法 | 第12页 |
| 1.3.3 酶催化法 | 第12-13页 |
| 1.3.4 生物法 | 第13-14页 |
| 1.4 L-异亮氨酸羟化酶 | 第14-15页 |
| 1.4.1 L-异亮氨酸羟化酶的来源与分类 | 第14页 |
| 1.4.2 L-异亮氨酸羟化酶催化机理 | 第14-15页 |
| 1.5 谷氨酸棒状杆菌的L-异亮氨酸合成途径 | 第15-16页 |
| 1.6 谷氨酸棒状杆菌的α-酮戊二酸合成途径 | 第16-17页 |
| 1.7 课题立题背景和研究内容 | 第17-19页 |
| 1.7.1 立题背景 | 第17-18页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19-20页 |
| 2.1.2 质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 引物 | 第20-21页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第21-25页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第23-25页 |
| 2.2.4 培养基 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-37页 |
| 2.3.1 细菌基因组DNA的小量提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 质粒的小量提取 | 第26页 |
| 2.3.3 目的片段扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.3.5 DNA的回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.6 重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.7 大肠杆菌感受态细胞转化实验 | 第29页 |
| 2.3.8 谷氨酸棒状杆菌感受态细胞的电转化实验 | 第29-30页 |
| 2.3.9 RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.3.10 RT-qPCR实验 | 第31-32页 |
| 2.3.11 SDS-PAGE实验 | 第32-33页 |
| 2.3.12 大肠杆菌重组L-异亮氨酸羟化酶(IDO)催化反应方法 | 第33-34页 |
| 2.3.13 谷氨酸棒状杆菌YILW内磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和丙酮酸羧化酶(PC)活性的测定 | 第34-35页 |
| 2.3.14 4-羟基异亮氨酸检测方法 | 第35-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-59页 |
| 3.1 L-异亮氨酸羟化酶的克隆表达及催化产物鉴定 | 第37-40页 |
| 3.1.1 ido基因的克隆 | 第37页 |
| 3.1.2 ido基因的表达 | 第37-38页 |
| 3.1.3 重组IDO催化反应产物分析 | 第38-40页 |
| 3.2 大肠杆菌转化法生产4-羟基异亮氨酸 | 第40-42页 |
| 3.2.1 表达载体pXMJido的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 大肠杆菌W3110/pXMJido菌株构建 | 第41页 |
| 3.2.3 W3110/pXMJido转化法合成4-羟基异亮氨酸 | 第41-42页 |
| 3.3 谷氨酸棒状杆菌转化法合成4-羟基异亮氨酸 | 第42-43页 |
| 3.3.1 谷氨酸棒状杆菌ATCC13032/pXMJido菌株构建 | 第42页 |
| 3.3.2 ATCC13032/pXMJido转化法合成4-羟基异亮氨酸 | 第42-43页 |
| 3.4 发酵法合成4-羟基异亮氨酸菌株的构建 | 第43-59页 |
| 3.4.1 YILWpXMJido菌株构建 | 第43-45页 |
| 3.4.2 YILW△kgd/pXMJido菌株构建 | 第45-50页 |
| 3.4.3 YILW(Pppc::Ptuf)/pXMJido和YILW(Ppyc::Ptuf)/pXMJido菌株构建 | 第50-54页 |
| 3.4.4 YILW(Ppyc::Ptuf)(aceA::Ptuf-ido)/pXMJido菌株构建 | 第54-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 5 展望 | 第60-61页 |
| 6 参考文献 | 第61-68页 |
| 7 研究生期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
