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生物法合成4-羟基异亮氨酸的研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
缩写表及基因符号说明第10-11页
1 前言第11-19页
    1.1 4-羟基异亮氨酸简介第11页
        1.1.1 4-羟基异亮氨酸的立体构型第11页
        1.1.2 4-HIL的理化性质第11页
    1.2 4-羟基异亮氨酸的功能第11-12页
    1.3 4-羟基异亮氨酸的生产方法第12-14页
        1.3.1 提取法第12页
        1.3.2 化学合成法第12页
        1.3.3 酶催化法第12-13页
        1.3.4 生物法第13-14页
    1.4 L-异亮氨酸羟化酶第14-15页
        1.4.1 L-异亮氨酸羟化酶的来源与分类第14页
        1.4.2 L-异亮氨酸羟化酶催化机理第14-15页
    1.5 谷氨酸棒状杆菌的L-异亮氨酸合成途径第15-16页
    1.6 谷氨酸棒状杆菌的α-酮戊二酸合成途径第16-17页
    1.7 课题立题背景和研究内容第17-19页
        1.7.1 立题背景第17-18页
        1.7.2 研究内容第18-19页
2 材料与方法第19-37页
    2.1 实验材料第19-21页
        2.1.1 菌株第19-20页
        2.1.2 质粒第20页
        2.1.3 引物第20-21页
    2.2 主要仪器和试剂第21-25页
        2.2.1 主要仪器第21-22页
        2.2.2 主要试剂第22-23页
        2.2.3 主要溶液第23-25页
        2.2.4 培养基第25页
    2.3 实验方法第25-37页
        2.3.1 细菌基因组DNA的小量提取第25-26页
        2.3.2 质粒的小量提取第26页
        2.3.3 目的片段扩增第26-27页
        2.3.4 琼脂糖凝胶电泳第27页
        2.3.5 DNA的回收纯化第27-28页
        2.3.6 重组质粒的构建第28-29页
        2.3.7 大肠杆菌感受态细胞转化实验第29页
        2.3.8 谷氨酸棒状杆菌感受态细胞的电转化实验第29-30页
        2.3.9 RNA提取第30-31页
        2.3.10 RT-qPCR实验第31-32页
        2.3.11 SDS-PAGE实验第32-33页
        2.3.12 大肠杆菌重组L-异亮氨酸羟化酶(IDO)催化反应方法第33-34页
        2.3.13 谷氨酸棒状杆菌YILW内磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)和丙酮酸羧化酶(PC)活性的测定第34-35页
        2.3.14 4-羟基异亮氨酸检测方法第35-37页
3 结果与讨论第37-59页
    3.1 L-异亮氨酸羟化酶的克隆表达及催化产物鉴定第37-40页
        3.1.1 ido基因的克隆第37页
        3.1.2 ido基因的表达第37-38页
        3.1.3 重组IDO催化反应产物分析第38-40页
    3.2 大肠杆菌转化法生产4-羟基异亮氨酸第40-42页
        3.2.1 表达载体pXMJido的构建第40-41页
        3.2.2 大肠杆菌W3110/pXMJido菌株构建第41页
        3.2.3 W3110/pXMJido转化法合成4-羟基异亮氨酸第41-42页
    3.3 谷氨酸棒状杆菌转化法合成4-羟基异亮氨酸第42-43页
        3.3.1 谷氨酸棒状杆菌ATCC13032/pXMJido菌株构建第42页
        3.3.2 ATCC13032/pXMJido转化法合成4-羟基异亮氨酸第42-43页
    3.4 发酵法合成4-羟基异亮氨酸菌株的构建第43-59页
        3.4.1 YILWpXMJido菌株构建第43-45页
        3.4.2 YILW△kgd/pXMJido菌株构建第45-50页
        3.4.3 YILW(Pppc::Ptuf)/pXMJido和YILW(Ppyc::Ptuf)/pXMJido菌株构建第50-54页
        3.4.4 YILW(Ppyc::Ptuf)(aceA::Ptuf-ido)/pXMJido菌株构建第54-59页
4 结论第59-60页
5 展望第60-61页
6 参考文献第61-68页
7 研究生期间发表论文情况第68-69页
8 致谢第69页

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