| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 核苷系化合物的应用 | 第11-17页 |
| 1.1.1 医药方面 | 第11-14页 |
| 1.1.2 食品领域 | 第14-16页 |
| 1.1.3 农业领域 | 第16-17页 |
| 1.2 核苷系化合物的合成 | 第17-18页 |
| 1.2.1 发酵法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 化学法 | 第18页 |
| 1.2.3 生物催化法 | 第18页 |
| 1.3 利用生物催化法存在的问题及解决办法 | 第18-19页 |
| 1.4 选题依据与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 嘌呤核苷磷酸化酶与尿苷磷酸化酶的克隆与表达 | 第21-43页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第22-27页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第22-24页 |
| 2.2.2 培养基 | 第24页 |
| 2.2.3 菌种和质粒 | 第24-25页 |
| 2.2.4 实验缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE试剂配制及胶的配制 | 第26-27页 |
| 2.2.6 主要仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.3.1 活化菌种 | 第27-28页 |
| 2.3.2 提取细菌基因组 | 第28页 |
| 2.3.3 目的基因的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.4 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.3.5 目的基因的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.7 细菌的转化 | 第31页 |
| 2.3.8 质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.9 DNA的双酶切 | 第32页 |
| 2.3.10 DNA的连接 | 第32页 |
| 2.3.11 利用CLUSTALX软件进行基因比对 | 第32页 |
| 2.3.12 工程菌的诱导 | 第32-33页 |
| 2.3.13 菌体蛋白样品的制备 | 第33页 |
| 2.3.14 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳[87] | 第33-34页 |
| 2.3.15 核苷磷酸化酶酶活测定 | 第34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.4.1 引物设计及目的基因deoD与udp的扩增 | 第34-36页 |
| 2.4.2 克隆载体pMD18-T-deoD与pMD18-T-udp的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.3 表达载体pET-28a-deoD与pET-28a-udp的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.4 E.coli(deoD)与E.coli(udp)目的基因的表达 | 第38-39页 |
| 2.4.5 工程菌E.coli(deoD)与E.coli(udp)酶活性检测 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-41页 |
| 2.6 结论 | 第41-43页 |
| 第三章 利用工程菌E.coli(deoD)与E.coli(udp)进行ara-DA的合成 | 第43-51页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 试剂与仪器 | 第43页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 3.3.1 游离细胞的制备 | 第43-44页 |
| 3.3.2 反应粗酶液的制备 | 第44页 |
| 3.3.3 第一步反应的合成体系 | 第44页 |
| 3.3.4 ara-DA标准曲线的创建 | 第44-45页 |
| 3.3.5 ara-DA的提取与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.4.1 工程菌E.coli(deoD)或E.coli(udp)催化合成ara-DA | 第46-49页 |
| 3.4.2 第一步反应生成中间产物的提纯与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50页 |
| 3.6 结论 | 第50-51页 |
| 第四章 腺苷脱氨酶基因克隆与表达 | 第51-59页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第51页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第51页 |
| 4.2.2 菌种和质粒 | 第51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 活化菌种 | 第51页 |
| 4.3.2 提取细菌基因组 | 第51-52页 |
| 4.3.3 目的基因add的扩增 | 第52页 |
| 4.3.4 工程菌的诱导 | 第52页 |
| 4.3.5 其他实验方法 | 第52页 |
| 4.3.6 工程菌E.coli(add)的AMPDAase酶活性检测[90] | 第52-53页 |
| 4.4 结果与分析 | 第53-57页 |
| 4.4.1 引物设计及目的基因add的扩增 | 第53-54页 |
| 4.4.2 克隆载体pMD18-T-add的构建 | 第54页 |
| 4.4.3 表达载体pET-28a-add的构建 | 第54-55页 |
| 4.4.4 E.coli(add)目的基因的表达 | 第55-56页 |
| 4.4.5 工程菌E.coli(add)酶活性检测 | 第56-57页 |
| 4.5 讨论 | 第57页 |
| 4.6 结论 | 第57-59页 |
| 第五章 利用工程菌E.coli(add)进行阿糖鸟苷的合成 | 第59-65页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 试剂与仪器 | 第59页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第59页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 5.3.1 游离细胞的制备 | 第59页 |
| 5.3.2 粗酶液的制备 | 第59页 |
| 5.3.3 产物ara-G的合成体系 | 第59-60页 |
| 5.3.4 ara-G标准曲线的建立 | 第60-61页 |
| 5.3.5 产物ara-G的提取与鉴定 | 第61页 |
| 5.4 结果与分析 | 第61-64页 |
| 5.4.1 E.coli(add)的游离细胞催化合成ara-G能力 | 第61-62页 |
| 5.4.2 E.coli(add)的粗酶液催化合成ara-G | 第62-63页 |
| 5.4.3 第二步反应生成终产物的提纯与鉴定 | 第63-64页 |
| 5.5 讨论 | 第64页 |
| 5.6 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73-75页 |
