| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 番茄叶绿素的合成与调控 | 第14-17页 |
| 1.1.1 叶绿素合成 | 第14-15页 |
| 1.1.2 叶绿体向有色体转变 | 第15-16页 |
| 1.1.3 转录因子与番茄叶绿素 | 第16-17页 |
| 1.2 番茄果实的成熟与调控 | 第17-19页 |
| 1.2.1 番茄果实发育与成熟 | 第17-18页 |
| 1.2.2 转录因子与番茄果实成熟 | 第18-19页 |
| 1.3 BEL1-Like Hmeodomain(BELL)家族的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.1 概述 | 第19页 |
| 1.3.2 BELL家族基因的生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.4 转录因子作用模式的研究方法 | 第20-24页 |
| 1.4.1 病毒诱导基因沉默技术(Virus-induced gene silencing,VIGS) | 第20-21页 |
| 1.4.2 植物遗传转化技术 | 第21-22页 |
| 1.4.3 凝胶阻滞迁移率技术(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA) | 第22-23页 |
| 1.4.4 染色质免疫共沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 SlBEL11转录因子功能初步分析 | 第26-43页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.3 试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 常用试剂配制 | 第27页 |
| 2.2.5 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.3 试验方法 | 第28-37页 |
| 2.3.1 番茄总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第29页 |
| 2.3.3 TRV2重组载体的构建 | 第29-33页 |
| 2.3.4 VIGS侵染 | 第33页 |
| 2.3.5 番茄果实SlBEL11基因沉默分析 | 第33-34页 |
| 2.3.6 基因进化树的绘制 | 第34-35页 |
| 2.3.7 SlBEL11基因的亚细胞定位 | 第35-37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.4.1 SlBEL11沉默促进果实叶绿素积累 | 第37-38页 |
| 2.4.2 SlBEL11基因的结构 | 第38-40页 |
| 2.4.3 SlBEL11表达分析 | 第40页 |
| 2.4.4 SlBEL11亚细胞定位分析 | 第40-41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-43页 |
| 2.5.1 VIGS是高通量筛选番茄果实成熟相关基因的有效方法 | 第41页 |
| 2.5.2 SlBEL11沉默使番茄果实叶绿素积累增强 | 第41-43页 |
| 第三章 SlBEL11 RNAi转基因植株的获得与分析 | 第43-55页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第43-45页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第43页 |
| 3.2.2 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.2.3 试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.4 常用试剂配制 | 第44页 |
| 3.2.5 组织培养基配制 | 第44页 |
| 3.2.6 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.3 试验方法 | 第45-50页 |
| 3.3.1 载体的构建 | 第45页 |
| 3.3.2 农杆菌介导的番茄的遗传转化(叶盘法) | 第45-47页 |
| 3.3.3 转基因植株分子鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.4 叶绿素测定 | 第48页 |
| 3.3.5 激光共聚焦显微镜 | 第48-49页 |
| 3.3.6 透射电子显微镜 | 第49页 |
| 3.3.7 质体计数 | 第49-50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-53页 |
| 3.4.1 SlBEL11 RNAi载体构建 | 第50页 |
| 3.4.2 转基因植株的获得和定性分析 | 第50-51页 |
| 3.4.3 SlBEL11 RNAi番茄的表型观察和定量分析 | 第51页 |
| 3.4.4 SlBEL11 RNAi影响番茄叶绿素合成和叶绿体发育 | 第51-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 SlBEL11调控番茄果实叶绿体发育和叶绿素合成 | 第55-80页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第55-57页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第55页 |
| 4.2.2 菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 4.2.3 试剂 | 第56页 |
| 4.2.4 常用试剂配制 | 第56-57页 |
| 4.2.5 主要仪器设备 | 第57页 |
| 4.3 试验方法 | 第57-67页 |
| 4.3.1 RNA-Seq样品的制备 | 第57-58页 |
| 4.3.2 RNA-Seq高通量测序 | 第58页 |
| 4.3.3 转录组数据分析步骤 | 第58-59页 |
| 4.3.4 番茄全基因组扫描BELL蛋白DNA结合模体 | 第59页 |
| 4.3.5 SlBEL11-HD蛋白的体外表达 | 第59-60页 |
| 4.3.6 凝胶阻滞迁移率试验 | 第60-64页 |
| 4.3.7 双荧光素报告酶试验 | 第64页 |
| 4.3.8 染色质免疫共沉淀试验 | 第64-67页 |
| 4.4 结果与分析 | 第67-78页 |
| 4.4.1 SlBEL11 RNAi番茄绿熟期果实的RNA-seq分析 | 第67-72页 |
| 4.4.2 SlBEL11 RNAi靶基因全局分析 | 第72-74页 |
| 4.4.3 SlBEL11调控叶绿体发育和叶绿素合成靶基因的验证 | 第74-78页 |
| 4.5 讨论 | 第78-80页 |
| 4.5.1 沉默SlBEL11影响光合作用相关基因的表达 | 第78页 |
| 4.5.2 SlBEL11调控叶绿体发育和叶绿素合成相关基因 | 第78-80页 |
| 第五章 SlBEL11调控番茄果实发育与成熟 | 第80-89页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 材料与试剂 | 第80-81页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第80页 |
| 5.2.2 实时荧光定量PCR | 第80页 |
| 5.2.3 类胡萝卜素含量的测定 | 第80-81页 |
| 5.3 结果与分析 | 第81-86页 |
| 5.3.1 SlBEL11 RNAi番茄果实破色延迟 | 第81页 |
| 5.3.2 SlBEL11 RNAi番茄成熟时期果实类胡萝卜素含量降低 | 第81-83页 |
| 5.3.3 SlBEL11影响植株和果实发育 | 第83-84页 |
| 5.3.4 SlBEL11影响番茄离层发育 | 第84-86页 |
| 5.4 讨论 | 第86-89页 |
| 5.4.1 SlBEL11基因影响果实破色和类胡萝卜素积累 | 第86-87页 |
| 5.4.2 SlBEL11基因对植株和果实发育有多种调控功能 | 第87-89页 |
| 第六章 结论与展望 | 第89-91页 |
| 6.1 结论 | 第89页 |
| 6.2 创新点 | 第89页 |
| 6.3 展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 附录 | 第97-109页 |
| 附录Ⅰ | 第97-103页 |
| 附录Ⅱ | 第103-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
