| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 伪狂犬病与伪狂犬病病毒 | 第13-16页 |
| 1.1.1 伪狂犬病 | 第13页 |
| 1.1.2 伪狂犬病病毒 | 第13-16页 |
| 1.2 伪狂犬病病毒潜伏感染研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 伪狂犬病病毒潜伏感染及其危害 | 第16页 |
| 1.2.2 伪狂犬病病毒潜伏感染的分子机制 | 第16-19页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9技术及其在疱疹病毒中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 伪狂犬病病毒潜伏感染模型的建立 | 第21-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-27页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、质粒和实验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 病毒基因组的提取 | 第21-22页 |
| 2.1.5 转移载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.1.6 转移载体质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.7 转移载体pOK-US9-LR-EGFP与PRVTJ基因组的共转染 | 第24页 |
| 2.1.8 重组报告病毒rPRVTJ-US9-EGFP的蚀斑筛选、纯化与鉴定 | 第24-25页 |
| 2.1.9 小鼠背根神经节中感觉神经细胞的分离与培养 | 第25页 |
| 2.1.10 感觉神经元的鉴定 | 第25页 |
| 2.1.11 感觉神经元的纯化 | 第25页 |
| 2.1.12 Ara-C和ACV药物毒性分析 | 第25-26页 |
| 2.1.13 潜伏感染条件优化 | 第26页 |
| 2.1.14 荧光定量PCR检测病毒基因组拷贝数 | 第26页 |
| 2.1.15 荧光定量RT-PCR检测病毒基因mRNA表达水平 | 第26-27页 |
| 2.1.16 病毒滴度测定 | 第27页 |
| 2.1.17 再激活的处理及鉴定 | 第27页 |
| 2.1.18 数据统计学分析 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-33页 |
| 2.2.1 重组报告病毒rPRVTJ-US9-EGFP的获得和鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.2 获得所需的小鼠感觉神经元 | 第28-29页 |
| 2.2.3 有效抑制非神经细胞的Ara-C浓度 | 第29-30页 |
| 2.2.4 ACV对神经细胞的毒性 | 第30页 |
| 2.2.5 最佳潜伏感染条件 | 第30-31页 |
| 2.2.6 确定PRV处于潜伏感染状态 | 第31-32页 |
| 2.2.7 潜伏感染后可被再激活 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 抑制伪狂犬病病毒再激活的sgRNA筛选及效果评价 | 第35-46页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-40页 |
| 3.1.1 细胞、质粒、实验动物 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.4 sgRNA表达载体的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.5 靶基因表达载体的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.6 不同sgRNA对靶基因编辑效果的鉴定 | 第39页 |
| 3.1.7 重组慢病毒的包装与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.8 抑制PRV再激活效果的评价 | 第40页 |
| 3.2 结果 | 第40-44页 |
| 3.2.1 获得携带sgRNA的重组载体 | 第40页 |
| 3.2.2 获得含有靶基因的真核表达载体 | 第40-42页 |
| 3.2.3 CRISPR/Cas9可对靶基因进行有效编辑 | 第42-43页 |
| 3.2.4 包装获得目的慢病毒 | 第43页 |
| 3.2.5 针对UL9基因的sgRNA可有效抑制潜伏PRV的再激活 | 第43-44页 |
| 3.3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
