| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略语 | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1 猪圆环病毒2型的研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1 病原学 | 第10-11页 |
| 1.1.1 PCV2的发现 | 第10页 |
| 1.1.2 PCV2的病毒粒子结构及生物特性 | 第10-11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11页 |
| 1.3 致病机理 | 第11-12页 |
| 1.3.1 免疫抑制 | 第11-12页 |
| 1.3.2 细胞凋亡与自噬 | 第12页 |
| 1.4 PCV2复制 | 第12页 |
| 1.5 PCV2与信号通路 | 第12-13页 |
| 1.6 PCV2的基因组结构及各编码蛋白的功能 | 第13-15页 |
| 1.6.1 Rep蛋白 | 第13页 |
| 1.6.2 Cap蛋白 | 第13-14页 |
| 1.6.3 ORF3蛋白 | 第14-15页 |
| 1.7 疫苗的研发 | 第15页 |
| 2 TRi C/CCT的概述 | 第15-18页 |
| 第二章 实验方案 | 第18-20页 |
| 1 研究目的及意义 | 第18页 |
| 2 研究的主要内容 | 第18-19页 |
| 3 研究路线 | 第19-20页 |
| 第三章 猪圆环病毒2型ORF3蛋白多克隆抗体的制备 | 第20-30页 |
| 1 材料和试剂 | 第20-21页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 1.2 细胞和病毒 | 第20页 |
| 1.3 试剂 | 第20页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.1 p ET-28a-ORF3原核表达载体的构建 | 第21-23页 |
| 2.1.1 ORF3基因片段的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.1.2 酶切 | 第22-23页 |
| 2.1.3 连接 | 第23页 |
| 2.1.4 转化 | 第23页 |
| 2.1.5 重组载体的鉴定 | 第23页 |
| 2.2 重组ORF3蛋白的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.3 重组ORF3蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| 2.4 多克隆抗体制备 | 第25页 |
| 2.5 多克隆抗体效价检验 | 第25-26页 |
| 2.5.1 Western Blot鉴定 | 第25页 |
| 2.5.2 间接免疫荧光（IFA）鉴定 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-29页 |
| 3.1 p ET28a-ORF3质粒PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 3.2 ORF3蛋白的诱导表达和纯化 | 第27页 |
| 3.3 Western Blot鉴定ORF3多克隆抗体 | 第27-28页 |
| 3.4 间接免疫荧光鉴定ORF3多克隆抗体 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 猪圆环病毒2型ORF3蛋白稳定表达细胞株的构建以及互作蛋白的筛选 | 第30-41页 |
| 1 材料和试剂 | 第30页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第30页 |
| 1.2 细胞 | 第30页 |
| 1.3 试剂 | 第30页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.1 ORF3基因的密码子优化 | 第30-31页 |
| 2.2 p DEST-SFB-ORF3-opt真核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.3 p HAGE-SFB-ORF3-opt-IRES-RFP真核表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.4 SFB-ORF3蛋白稳定表达细胞株的构建 | 第33-34页 |
| 2.5 串联亲和纯化联合质谱筛选ORF3蛋白的互作蛋白 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-39页 |
| 3.1 p DEST-SFB-ORF3-opt质粒PCR鉴定 | 第35页 |
| 3.2 p HAGE-SFB-ORF3-opt-IRES-RFP质粒PCR和双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3 稳定表达SFB-ORF3蛋白的PK15细胞株的建立 | 第36-38页 |
| 3.4 串联亲和纯化 | 第38-39页 |
| 3.5 ORF3蛋白互作蛋白质谱鉴定 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 猪圆环病毒2型ORF3蛋白互作蛋白的验证 | 第41-50页 |
| 1 材料和试剂 | 第41页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 1.2 细胞 | 第41页 |
| 1.3 试剂 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-45页 |
| 2.1 细胞总RNA提取及逆转录 | 第41-42页 |
| 2.2 p XJ40-HA-CCT和p XJ40-FLAG-ORF3-opt真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第43-45页 |
| 2.4 亚细胞定位 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| 3.1 p XJ40-HA-CCT和p XJ40-FLAG-ORF3-opt质粒PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第45-47页 |
| 3.2 FLAG-Co-IP验证CCT的5个亚基与ORF3蛋白的相互作用 | 第47页 |
| 3.3 HA-Co-IP验证CCT5与ORF3蛋白相互作用 | 第47-48页 |
| 3.4 亚细胞定位验证CCT5与ORF3蛋白相互作用 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
