| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 氮调控因子GlnR的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1 GlnR的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 GlnR在不同细菌氮代谢调控中的作用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 GlnR介导氮磷代谢 | 第12-13页 |
| 1.1.4 GlnR对多糖利用及碳代谢的调控 | 第13-14页 |
| 1.1.5 GlnR对次级代谢的影响 | 第14页 |
| 1.1.6 GlnR对酰基化调控的影响 | 第14页 |
| 1.2 微生物蛋白质的酰基化 | 第14-18页 |
| 1.2.1 蛋白质的去乙酰化反应机制 | 第15-17页 |
| 1.2.2 蛋白质的去乙酰化酶 | 第17页 |
| 1.2.3 去酰基化酶的调控 | 第17-18页 |
| 1.3 耻垢分枝杆菌中压力响应基因whiB3 | 第18-21页 |
| 1.3.1 分枝杆菌的whiB家族 | 第18-19页 |
| 1.3.2 分枝杆菌中whiB3的研究现状 | 第19-21页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第2章 放线菌中氮调控因子GlnR直接调控蛋白质去乙酰化酶的转录 | 第23-44页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验原理 | 第24页 |
| 2.3 实验材料 | 第24-30页 |
| 2.3.1 实验菌种和质粒 | 第24页 |
| 2.3.2 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.3.3 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3.4 常用培养基和实验缓冲液的配制 | 第26-30页 |
| 2.4 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.4.1 目的基因的克隆及表达 | 第30页 |
| 2.4.2 目的蛋白的表达及纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.3 EMSA凝胶阻滞实验 | 第31-34页 |
| 2.4.4 RNA的抽提和RT-PCR | 第34-35页 |
| 2.4.5 Western Blot分析 | 第35-36页 |
| 2.4.6 无标记定量质谱分析体外乙酰化肽段 | 第36页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第36-43页 |
| 2.5.1 放线菌中存在两种类型的赖氨酸去乙酰化酶 | 第36-37页 |
| 2.5.2 GlnR直接结合S coelicolor、S. erythraea和M. smegmatis去乙酰化酶编码基因的启动子区域 | 第37-39页 |
| 2.5.3 GlnR调控S. coelicolor、S. erythraea和M. smegmatis去乙酰化酶编码基因的转录 | 第39-40页 |
| 2.5.4 氮源对S. coelicolor、S. erythraea和M. smegmatis去乙酰化酶编码基因转录水平的影响 | 第40-41页 |
| 2.5.5 GlnR介导的氮源对细胞内全蛋白乙酰化水平的影响 | 第41-42页 |
| 2.5.6 放线菌中GlnR结合位点是保守存在的 | 第42-43页 |
| 2.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第3章 耻垢分枝杆菌中氮调控因子GlnR对压力响应基因whiB3调控机制的研究 | 第44-69页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验原理 | 第44-45页 |
| 3.3 实验材料 | 第45-48页 |
| 3.3.1 实验菌种和质粒 | 第45页 |
| 3.3.2 实验试剂 | 第45-46页 |
| 3.3.3 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.3.4 常用培养基和实验缓冲液的配制 | 第47-48页 |
| 3.4 实验方法 | 第48-61页 |
| 3.4.1 whiB3基因的克隆及表达 | 第48-51页 |
| 3.4.2 WhiB3蛋白的表达及纯化 | 第51页 |
| 3.4.3 whiB3敲除及过表达菌株的构建 | 第51-56页 |
| 3.4.4 EMSA凝胶阻滞实验 | 第56页 |
| 3.4.5 RNA的抽提和RT-PCR | 第56-57页 |
| 3.4.6 细菌CFU菌落统计 | 第57-58页 |
| 3.4.7 以lacZ为报告基因的whiB3启动子检测菌株的构建 | 第58-60页 |
| 3.4.8 p-半乳糖苷酶活性测定方法 | 第60页 |
| 3.4.9 定点突变实验 | 第60-61页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 3.5.1 GlnR直接结合与M. smegmatis中whiB3的启动子区域 | 第61-62页 |
| 3.5.2 GlnR激活M. smegmatis中whiB3的转录 | 第62页 |
| 3.5.3 氮源对whiB3转录水平的影响 | 第62-63页 |
| 3.5.4 GlnR介导whiB3对氮源的响应 | 第63-66页 |
| 3.5.5 氮源对WhiB3的靶基因的转录水平有影响 | 第66-68页 |
| 3.6 本章小结 | 第68-69页 |
| 第4章 总结与展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
