| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 何首乌鉴别 | 第14-15页 |
| 1.1.1 何首乌易混品种 | 第14-15页 |
| 1.1.2 何首乌种内差异性研究 | 第15页 |
| 1.2 何首乌化学成分 | 第15-17页 |
| 1.3 何首乌药理作用 | 第17-18页 |
| 1.4 何首乌组织培养及毛状根培养 | 第18-21页 |
| 1.4.1 离体快速繁殖 | 第18-19页 |
| 1.4.2 组织培养 | 第19-20页 |
| 1.4.3 毛状根培养 | 第20-21页 |
| 1.5 二苯乙烯苷合成代谢 | 第21-29页 |
| 1.5.1 芪类化合物 | 第21-22页 |
| 1.5.2 苯丙氨酸途径 | 第22-24页 |
| 1.5.3 芪合酶 | 第24-27页 |
| 1.5.4 糖苷转移酶 | 第27-28页 |
| 1.5.5 二苯乙烯苷合成路径研究 | 第28-29页 |
| 1.6 抑制消减杂交 | 第29-30页 |
| 1.7 转录组测序及数字表达谱技术在药用植物研究中的应用 | 第30-31页 |
| 1.8 本课题的研究意义及主要内容 | 第31-33页 |
| 1.8.1 本课题研究意义 | 第31-32页 |
| 1.8.2 本课题主要研究内容 | 第32页 |
| 1.8.3 技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 何首乌二苯乙烯苷含量检测 | 第33-41页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 供试品溶液制备 | 第34页 |
| 2.2.2 标准品溶液制备 | 第34页 |
| 2.2.3 常温浸提与水浴浸提对照 | 第34页 |
| 2.2.4 色谱条件 | 第34页 |
| 2.2.5 线性关系考察 | 第34-36页 |
| 2.2.6 精密度试验 | 第36页 |
| 2.2.7 重复性试验 | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 2.3.1 水浴与冷浸效果比较 | 第36-37页 |
| 2.3.2 冷浸时间考察 | 第37页 |
| 2.3.3 不同产地何首乌二苯乙烯苷含量考察 | 第37-39页 |
| 2.3.4 何首乌不同组织二苯乙烯苷含量考察 | 第39-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 抑制消减杂交筛选可能的目的基因 | 第41-73页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第41-43页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第42-43页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.5 RNA 操作的实验器材预处理 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-61页 |
| 3.2.1 抽提总 RNA | 第43-44页 |
| 3.2.2 RNA 样品质量检测 | 第44-45页 |
| 3.2.3 mRNA 的分离纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.4 抑制消减杂交 | 第46-52页 |
| 3.2.5 SSH 目的片段的分离回收 | 第52-53页 |
| 3.2.6 目的片段的保存与测序 | 第53-55页 |
| 3.2.7 SSH 片段的 BLAST 注释 | 第55-56页 |
| 3.2.8 3’5’RACE 扩增全长序列 | 第56-59页 |
| 3.2.9 内参β-actin 检测 cDNA 完整性 | 第59-60页 |
| 3.2.10 RACE 目的片段的分离回收 | 第60页 |
| 3.2.11 RACE 片段的保存与测序 | 第60-61页 |
| 3.2.12 全长序列的拼接与注释 | 第61页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第61-72页 |
| 3.3.1 RNA 抽提质量检测 | 第61-62页 |
| 3.3.2 内参β-actin 检测 | 第62页 |
| 3.3.3 抑制消减杂交实验评估 | 第62-64页 |
| 3.3.4 SSH 测序结果汇总 | 第64页 |
| 3.3.5 SSH 基因功能注释 | 第64-68页 |
| 3.3.6 RACE 扩增效果 | 第68页 |
| 3.3.7 RACE 序列分析 | 第68-72页 |
| 3.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 第四章 何首乌块根间差异表达基因的筛选与分析 | 第73-123页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第74-75页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第74页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第75页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第75页 |
| 4.1.5 RNA 操作的实验器材预处理 | 第75页 |
| 4.2 实验方法 | 第75-89页 |
| 4.2.1 抽提总 RNA | 第75页 |
| 4.2.2 RNA 样品质量检测 | 第75-76页 |
| 4.2.3 RNA-Seq 测序文库制备 | 第76-77页 |
| 4.2.4 RNA-Seq 文库测序 | 第77页 |
| 4.2.5 转录组信息分析 | 第77-82页 |
| 4.2.6 DGE 文库的制备与测序 | 第82-83页 |
| 4.2.7 DGE 信息学分析 | 第83-86页 |
| 4.2.8 qPCR 检验基因表达水平 | 第86-89页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第89-121页 |
| 4.3.1 RNA 质量检测 | 第89-90页 |
| 4.3.2 RNA-seq 产量统计 | 第90-91页 |
| 4.3.3 组装结果 | 第91-92页 |
| 4.3.4 转录组基因的扩增检测 | 第92页 |
| 4.3.5 Unigene 功能注释 | 第92-94页 |
| 4.3.6 转录组序列的全局性生物信息学分析 | 第94-97页 |
| 4.3.7 DGE 文库质量 | 第97-100页 |
| 4.3.8 基因表达注释 | 第100-101页 |
| 4.3.9 差异表达基因的 GO 功能富集分析 | 第101页 |
| 4.3.10 Pathway 显著性富集分析 | 第101-105页 |
| 4.3.11 内参的筛查分析 | 第105-108页 |
| 4.3.12 待测基因的 RT-PCR 检验 | 第108-109页 |
| 4.3.13 二苯乙烯苷合成路径的分析 | 第109-115页 |
| 4.3.14 块根中涉及响应机制的差异基因 | 第115-120页 |
| 4.3.15 块根中涉及信号通路的差异基因 | 第120-121页 |
| 4.4 本章小结 | 第121-123页 |
| 第五章 不同组织间差异表达基因的筛选与分析 | 第123-143页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第123-124页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第123页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第123页 |
| 5.1.3 溶液配制 | 第123页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第123页 |
| 5.1.5 RNA 操作的实验器材预处理 | 第123-124页 |
| 5.2 实验方法 | 第124-127页 |
| 5.2.1 总 RNA 的提取 | 第124页 |
| 5.2.2 RNA 样品质量检测 | 第124页 |
| 5.2.3 DGE 文库的制备与测序 | 第124页 |
| 5.2.4 DGE 信息学分析 | 第124-125页 |
| 5.2.5 qPCR 检验基因表达水平 | 第125-127页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第127-141页 |
| 5.3.1 RNA 质量检测 | 第127页 |
| 5.3.2 DGE 文库质量 | 第127-131页 |
| 5.3.3 基因表达注释 | 第131-132页 |
| 5.3.4 差异表达基因筛选 | 第132-133页 |
| 5.3.5 反义链的转录分析 | 第133页 |
| 5.3.6 表达模式聚类分析 | 第133-134页 |
| 5.3.7 GO 功能富集分析 | 第134-135页 |
| 5.3.8 待测基因的 RT-PCR 检测 | 第135-137页 |
| 5.3.9 Pathway 显著性富集分析 | 第137-141页 |
| 5.3.10 不同组织间涉及响应机制的差异基因 | 第141页 |
| 5.4 本章小结 | 第141-143页 |
| 结论、展望及创新点 | 第143-146页 |
| 结论 | 第143-144页 |
| 展望 | 第144-145页 |
| 本研究的创新点 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-158页 |
| 附录 | 第158-196页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第196-197页 |
| 致谢 | 第197-199页 |
| 附件 | 第199页 |