| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-35页 |
| 1.1 生物基化学品概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 生物炼制 | 第9页 |
| 1.1.2 生物基化学品 | 第9-10页 |
| 1.2 2,3-BD概况 | 第10-15页 |
| 1.2.1 2,3-BD的理化性质 | 第11页 |
| 1.2.2 2,3-BD光学立体异构体与形成机制 | 第11-14页 |
| 1.2.3 2,3-BD的用途 | 第14-15页 |
| 1.3 2,3-BD的生产方法 | 第15-19页 |
| 1.3.1 化学法 | 第15-17页 |
| 1.3.2 生物法 | 第17-19页 |
| 1.4 微生物合成2,3-BD的代谢途径 | 第19-22页 |
| 1.5 代谢副产物与中间产物 | 第22-25页 |
| 1.5.1 乙偶姻 | 第22-23页 |
| 1.5.2 乳酸 | 第23页 |
| 1.5.3 乙酸 | 第23-24页 |
| 1.5.4 乙醇 | 第24-25页 |
| 1.5.5 琥珀酸 | 第25页 |
| 1.6 高产2,3-BD研究进展 | 第25-31页 |
| 1.6.1 菌种选育 | 第25-29页 |
| 1.6.2 发酵条件优化 | 第29-31页 |
| 1.7 代谢流量分析 | 第31-32页 |
| 1.8 本论文的立题依据与研究内容 | 第32-35页 |
| 1.8.1 立题依据 | 第32-33页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 过表达 2,3-BD 合成途径关键酶基因对 K. pneumoniae 发酵生产2,3-BD 的影响 | 第35-81页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第35-42页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第35-37页 |
| 2.2.2 引物 | 第37页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第37-39页 |
| 2.2.4 仪器 | 第39-40页 |
| 2.2.5 常用溶液的配置 | 第40-41页 |
| 2.2.6 常用培养基 | 第41-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-57页 |
| 2.3.1 过表达质粒的构建 | 第42-48页 |
| 2.3.2 过表达菌株的构建 | 第48页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳 | 第48-50页 |
| 2.3.4 胞内总蛋白的测定 | 第50-51页 |
| 2.3.5 菌体浓度的测定 | 第51-52页 |
| 2.3.6 葡萄糖及代谢产物浓度的测定 | 第52-53页 |
| 2.3.7 酶活测定 | 第53-55页 |
| 2.3.8 NADH 和 NAD~+浓度的测定 | 第55-57页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第57-80页 |
| 2.4.1 过表达质粒的构建与验证 | 第57-69页 |
| 2.4.2 过表达菌株的构建与验证 | 第69-71页 |
| 2.4.3 过表达菌株 ALDC、ALS 和 AR 酶活分析 | 第71页 |
| 2.4.4 过表达菌株生长曲线 | 第71-73页 |
| 2.4.5 过表达菌株发酵实验 | 第73页 |
| 2.4.6 过表达菌株 KG-rs 的 SDS-PAGE 电泳 | 第73-75页 |
| 2.4.7 过表达菌株 KG-rs 发酵实验 | 第75-77页 |
| 2.4.8 过表达菌株 KG-rs 的胞内氧化还原状态 | 第77页 |
| 2.4.9 过表达菌株KG-rs不同碳源发酵实验 | 第77-80页 |
| 2.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第三章 敲除副产物合成途径关键酶基因对 K. pneumoniae 发酵生产2,3-BD 的影响 | 第81-115页 |
| 3.1 引言 | 第81-82页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第82-85页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第82-83页 |
| 3.2.2 引物 | 第83-84页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第84页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第84页 |
| 3.2.5 常用培养基 | 第84-85页 |
| 3.2.6 常用溶液的配置 | 第85页 |
| 3.3 实验方法 | 第85-90页 |
| 3.3.1 Klebsiella两亲本结合 | 第85-86页 |
| 3.3.2 酶活测定方法 | 第86-90页 |
| 3.3.3 胞内总蛋白的测定 | 第90页 |
| 3.3.4 菌体浓度的测定 | 第90页 |
| 3.3.5 葡萄糖及代谢产物浓度的测定 | 第90页 |
| 3.3.6 NADH 和 NAD+浓度的测定 | 第90页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第90-114页 |
| 3.4.1 自杀质粒的构建与验证 | 第90-93页 |
| 3.4.2 重组菌株的构建与验证 | 第93-96页 |
| 3.4.3 重组菌株 LDH、 ADH 和 PTA 酶活分析 | 第96-98页 |
| 3.4.4 重组菌株遗传稳定性的验证 | 第98页 |
| 3.4.5 重组菌株生长及发酵性能的测定 | 第98-102页 |
| 3.4.6 重组菌株的胞内氧化还原状态 | 第102-103页 |
| 3.4.7 重组菌株不同碳源发酵实验 | 第103-107页 |
| 3.4.8 重组菌株 2 , 3-BD 合成代谢流量分析 | 第107-114页 |
| 3.5 本章小结 | 第114-115页 |
| 第四章 结论与展望 | 第115-119页 |
| 4.1 结论 | 第115-116页 |
| 4.2 本文创新点 | 第116-117页 |
| 4.3 展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-133页 |
| 博士在学期间发表论文及参加科研情况说明 | 第133-134页 |
| 附录 | 第134-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
