| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-13页 |
| 第二章 Saquinavir(SQV)对TLR4信号通路早期事件的影响 | 第13-23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第13-17页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第13-14页 |
| 2.1.2 BIAcore蛋白质相互作用分析 | 第14-15页 |
| 2.1.3 细胞培养与质粒 | 第15页 |
| 2.1.4 HEK293-MD2/CD14稳定转染细胞系的构建 | 第15页 |
| 2.1.5 PMA诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞 | 第15-16页 |
| 2.1.6 Saquinavir/沙奎那韦的配制 | 第16页 |
| 2.1.7 免疫共沉淀与免疫印迹 | 第16-17页 |
| 2.2 结果 | 第17-23页 |
| 2.2.1 SQV不阻断HMGB1与MD2的结合 | 第17-18页 |
| 小结 | 第18页 |
| 2.2.2 SQV阻断LPS引起的TLR4受体同源二聚化 | 第18-19页 |
| 小结 | 第19页 |
| 2.2.3 SQV阻断TLR4募集接头蛋白MyD88 | 第19-21页 |
| 小结 | 第21页 |
| 2.2.4 SQV对LPS诱导的TLR4—TRIF通路的影响 | 第21-23页 |
| 小结 | 第22-23页 |
| 第三章 SQV对TLR4介导信号通路的选择性评估 | 第23-30页 |
| 3.1 材料与方法(仅列出与之前不重复的材料、方法) | 第23-25页 |
| 3.1.1 主要试剂及来源 | 第23页 |
| 3.1.2 细胞刺激与免疫印迹 | 第23-24页 |
| 3.1.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第24页 |
| 3.1.4 HEK293-NF-κB SEAP/CD14/MD2/TLR4-HA/GFP稳定转染细胞系构建 | 第24页 |
| 3.1.5 HEK-BIue~(TM) Detection实时检测SEAP水平 | 第24-25页 |
| 3.2 结果 | 第25-30页 |
| 3.2.1 SQV在受体水平特异性抑制TLR4诱导的MyD88通路活化 | 第25-27页 |
| 小结 | 第26-27页 |
| 3.2.2 SQV在NF-kB水平非特异性抑制多种PRR引起的TNF-α释放 | 第27-28页 |
| 小结 | 第28页 |
| 3.2.3 SQV抑制TNF-α引起的NF-κB活化 | 第28-30页 |
| 小结 | 第29-30页 |
| 第四章 Cathepsin V在TLR4信号通路中的作用机制 | 第30-44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第30-34页 |
| 4.1.1 主要试剂与来源见表4.1 | 第30-31页 |
| 4.1.2 细胞刺激、免疫共沉淀与免疫印迹 | 第31页 |
| 4.1.3 CTSV siRNA瞬时转染THP-1单核巨噬细胞 | 第31页 |
| 4.1.4 CTSV与CTSV活性变异体质粒构建与转染 | 第31-33页 |
| 4.1.5 TNF-α和IL-6 ELISA检测 | 第33页 |
| 4.1.6 SID26681509(SID)和STO33438(STO)的配制 | 第33页 |
| 4.1.7 LDH细胞毒性分析 | 第33页 |
| 4.1.8 CTSV活性分析 | 第33-34页 |
| 4.2 结果 | 第34-44页 |
| 4.2.1 CTSV与TLR4-MyD88复合体存在相互作用 | 第34-35页 |
| 小结 | 第35页 |
| 4.2.2 CTSV表达受限可减弱TLR1/2、TLR4、IL-1R的激活但不影响TLR3 | 第35-36页 |
| 小结 | 第36页 |
| 4.2.3 CTSV与TLR4之间的相互作用不需要CTSV的蛋白酶活性 | 第36-38页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 4.2.4 CTSV抑制剂SID26681509抑制TLR4下游MyD88和TRIF活化 | 第38-39页 |
| 小结 | 第39页 |
| 4.2.5 SID非特异性抑制TLR1/2,3,4和TNFR介导的TNF-α释放或NF-κB活化 | 第39-41页 |
| 小结 | 第41页 |
| 4.2.6 SQV、SID、ST0334可阻断CTSV-TLR4相互作用且SQV效果最强 | 第41-44页 |
| 小结 | 第43-44页 |
| 第五章 SQV对肝脏缺血再灌注损伤的保护不需要药物预处理 | 第44-47页 |
| 5.1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 5.1.1 肝脏热缺血再灌注损伤(Liver IR)模型建立 | 第44页 |
| 5.1.2 SQV预处理对Liver IR保护作用的必要性评估实验分组 | 第44-45页 |
| 5.1.3 SQV供在体实验使用的配制方法 | 第45页 |
| 5.2 结果 | 第45-47页 |
| 小结 | 第46-47页 |
| 第六章 讨论 | 第47-49页 |
| 第七章 结论 | 第49-50页 |
| 文献综述 | 第50-57页 |
| 1 TLR4信号通路及其重要配体LPS和HMGB1 | 第50-52页 |
| 2 以TLR4为靶点的药物研发现状 | 第52-54页 |
| 3 HMGB1-TLR4信号通路轴介导的疾病及其现有治疗手段 | 第54-57页 |
| 3.1 肝脏缺血再灌注损伤 | 第54页 |
| 3.2 器官移植 | 第54-55页 |
| 3.3 出血性休克/创伤 | 第55页 |
| 3.4 肿瘤 | 第55页 |
| 3.5 癫痫 | 第55页 |
| 3.6 靶向HMGB1-TLR4信号轴 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录A | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读八年制博士学位期间的研究成果 | 第67页 |
