| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 两种常见蔬菜病毒病害简介 | 第14-20页 |
| 1.1.1 番茄黄化曲叶病毒 | 第14-16页 |
| 1.1.1.1 番茄黄化曲叶病毒的分类及特征 | 第14页 |
| 1.1.1.2 番茄黄化曲叶病毒的传播媒介及方式 | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 番茄黄化曲叶病毒的生物学特性 | 第15页 |
| 1.1.1.4 番茄黄化曲叶病毒病发生情况及田间寄主范围 | 第15-16页 |
| 1.1.1.5 番茄黄化曲叶病毒的检测技术 | 第16页 |
| 1.1.2 黄瓜绿斑驳花叶病毒 | 第16-20页 |
| 1.1.2.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒特征 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 黄瓜绿斑驳花叶病毒分类 | 第17-18页 |
| 1.1.2.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒症状特征及寄主范围 | 第18-19页 |
| 1.1.2.4 黄瓜绿斑驳花叶病毒的生物学特性 | 第19页 |
| 1.1.2.5 黄瓜绿斑驳花叶病毒的接种及检测技术 | 第19-20页 |
| 1.2 桃树病毒病简介 | 第20-23页 |
| 1.2.1 桃树病毒病种类 | 第20页 |
| 1.2.2 桃树病毒病发生情况 | 第20-21页 |
| 1.2.3 类病毒概述 | 第21页 |
| 1.2.4 类病毒的传播 | 第21页 |
| 1.2.5 类病毒的检测 | 第21-23页 |
| 1.2.5.1 生物学鉴定 | 第21-22页 |
| 1.2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第22页 |
| 1.2.5.3 核酸杂交 | 第22-23页 |
| 1.2.5.4 RT-PCR检测 | 第23页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第23-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实脸材料与仪器 | 第26-28页 |
| 2.1.1 病毒样品的采集和供试植株 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第27页 |
| 2.1.4 实验所需试剂及配制 | 第27-28页 |
| 2.2 番茄黄化曲叶病毒的鉴定及检测 | 第28-33页 |
| 2.2.1 样品DNA提取 | 第28页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 外壳蛋白的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.2.3.2 全基因组DNA的PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.4 PCR产物的克隆及测序 | 第30-33页 |
| 2.2.4.1 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 连接载体 | 第31页 |
| 2.2.4.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.4.4 连接产物转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| 2.2.4.5 碱裂解法提取质粒DNA | 第32页 |
| 2.2.4.6 重组克隆的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第33页 |
| 2.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒的鉴定与检测 | 第33-36页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第33页 |
| 2.3.2 样品RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.3.3 反转录cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 2.3.4 RT-PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.4.1 外壳蛋白的PCR扩增 | 第35页 |
| 2.3.4.2 CGMMV全基因组克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.5 PCR产物的克隆及测序 | 第36页 |
| 2.3.5.1 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收 | 第36页 |
| 2.3.5.2 连接载体 | 第36页 |
| 2.3.5.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.3.5.4 连接产物转化大肠杆菌 | 第36页 |
| 2.3.5.5 碱裂解法提取质粒DNA | 第36页 |
| 2.3.5.6 重组克隆的PCR鉴定 | 第36页 |
| 2.3.5.7 序列分析 | 第36页 |
| 2.4 山东省肥城桃病毒病的鉴定与检测 | 第36-40页 |
| 2.4.1 引物设计与合成 | 第36-37页 |
| 2.4.2 样品RNA提取 | 第37页 |
| 2.4.3 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE) | 第37-38页 |
| 2.4.4 反转录cDNA的合成 | 第38页 |
| 2.4.5 RT-PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.4.6 PCR产物的克隆及测序 | 第39-40页 |
| 2.4.6.1 琼脂糖凝胶电泳及DNA片段回收 | 第39页 |
| 2.4.6.2 连接载体 | 第39页 |
| 2.4.6.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 2.4.6.4 连接产物转化大肠杆菌 | 第39页 |
| 2.4.6.5 碱裂解法提取质粒DNA | 第39页 |
| 2.4.6.6 重组克隆的PCR鉴定 | 第39页 |
| 2.4.6.7 序列分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-58页 |
| 3.1 番茄黄化曲叶病毒结果与分析 | 第40-46页 |
| 3.1.1 山东省番茄种苗TYLCV带毒率检测结果 | 第40页 |
| 3.1.2 三省TYLCV发病情况检测结果 | 第40页 |
| 3.1.3 TYLCV寄主范围的测定 | 第40-42页 |
| 3.1.4 TYLCV新寄主全序列测定和分析 | 第42-46页 |
| 3.1.4.1 TYLCV新寄主的PCR检测 | 第42-43页 |
| 3.1.4.2 TYLCV新寄主全长的扩增及序列测定 | 第43页 |
| 3.1.4.3 TYLCV新寄主全长序列分析 | 第43页 |
| 3.1.4.4 TYLCV新寄主序列核苷酸同源性比较 | 第43-45页 |
| 3.1.4.5 系统进化树分析 | 第45-46页 |
| 3.2 黄瓜绿斑驳花叶病毒病病原的鉴定 | 第46-53页 |
| 3.2.1 CGMMV在山东省发生情况检测结果 | 第46-47页 |
| 3.2.2 CP基因的RT-PCR检测结果 | 第47-48页 |
| 3.2.3 CGMMV全序列测定和分析 | 第48-49页 |
| 3.2.3.1 CGMMV全序列扩增策略 | 第48页 |
| 3.2.3.2 CGMMV全序列扩增结果 | 第48-49页 |
| 3.2.4 CGMMV重组质粒的电泳鉴定及PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.2.5 CGMMV黄瓜、甜瓜和丝瓜全基因组测序和结构分析 | 第49-51页 |
| 3.2.6 CGMMV黄瓜、甜瓜和丝瓜分离物全基因系统进化树构建 | 第51-53页 |
| 3.3 山东省肥城桃病毒病的检测结果 | 第53-58页 |
| 3.3.1 二维聚丙烯凝胶电泳检测 | 第53-54页 |
| 3.3.2 样品检测结果 | 第54页 |
| 3.3.3 啤酒矮化类病毒RT-PCR扩增 | 第54-55页 |
| 3.3.3.1 桃树样品携带HSVd的RT-PCR分析 | 第54-55页 |
| 3.3.3.2 HSVd-SDH1序列测定及比较分析 | 第55页 |
| 3.3.4 桃潜隐花叶类病毒RT-PCR扩增 | 第55-56页 |
| 3.3.4.1 桃树样品携带PLMVd的RT-PCR分析 | 第55-56页 |
| 3.3.4.2 PLMVd-SDP2序列测定及比较分析 | 第56页 |
| 3.3.5 苹果褪绿叶斑病毒RT-PCR扩增 | 第56-58页 |
| 3.3.5.1 桃树样品携带ACLSV的RT-PCR分析 | 第56-57页 |
| 3.3.5.2 ACLSV-SDA3序列测定及比较分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 番茄黄化曲叶病毒 | 第58-59页 |
| 4.1.1 山东省番茄种苗TYLCV带毒率检测结果 | 第58页 |
| 4.1.2 山东省、吉林省和辽宁省TYLCV发生情况 | 第58页 |
| 4.1.3 TYLCV寄主范围的初步确定 | 第58-59页 |
| 4.1.4 本研究中TYLCV新寄主序列分析 | 第59页 |
| 4.2 黄瓜绿斑驳花叶病毒 | 第59-60页 |
| 4.2.1 山东省CGMMV发生情况 | 第59页 |
| 4.2.2 黄瓜、甜瓜和丝瓜分离物序列分析 | 第59-60页 |
| 4.3 桃树病毒病 | 第60-61页 |
| 4.3.1 桃树类病毒检测情况 | 第60页 |
| 4.3.2 桃树病毒病检测情况 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
