| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩写及符号说明 | 第9-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第15页 |
| 1.1.2 植物花器官发育的模型 | 第15-17页 |
| 1.2 SEP类基因研究进展 | 第17-22页 |
| 1.2.1 SEP类基因在单子叶植物中的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.2 SEP类基因在双子叶植物中的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3 酵母双杂交技术 | 第22-24页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术原理 | 第22-23页 |
| 1.3.2 酵母双杂交技术的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 金柑遗传转化技术研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| 1.6 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-49页 |
| 2.1 材料 | 第27-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验所需培养基及培养条件 | 第29-33页 |
| 2.1.4 实验所需引物 | 第33-34页 |
| 2.1.5 实验药品 | 第34页 |
| 2.1.6 实验所用生物学软件 | 第34-35页 |
| 2.2 实验仪器与器材 | 第35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-49页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第36页 |
| 2.3.3 浓度及纯度测定 | 第36页 |
| 2.3.4 逆转录(RT-PCR) | 第36-37页 |
| 2.3.5 FcSEP1同源序列克隆 | 第37页 |
| 2.3.6 DNA片段的回收 | 第37-38页 |
| 2.3.7 FcSEP1实时荧光定量PCR | 第38页 |
| 2.3.8 超量表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 2.3.9 野生型拟南芥(WT)的种植与遗传转化 | 第41页 |
| 2.3.10 根癌农杆菌介导植物超量表达载体对金柑的遗传转化 | 第41-42页 |
| 2.3.11 金柑花蕾酵母双杂交cDNA文库构建 | 第42-44页 |
| 2.3.12 酵母双杂交pGBKT7-FcSEP1诱饵载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.3.13 pGBKT7-FcSEP1诱饵载体的毒性和自激活检测 | 第45-46页 |
| 2.3.14 酵母双杂交筛选实验 | 第46-47页 |
| 2.3.15 阳性克隆鉴定 | 第47-48页 |
| 2.3.16 酵母体内一对一回转验证实验 | 第48页 |
| 2.3.17 阳性候选蛋白生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 第三章 结果与分析 | 第49-81页 |
| 3.1 金柑花蕾总RNA的提取及检测 | 第49-50页 |
| 3.2 FcSEP1基因cDNA全长序列的获得 | 第50页 |
| 3.3 FcSEP1基因生物信息学分析 | 第50-61页 |
| 3.3.1 FcSEP1基因编码的蛋白质一级结构分析 | 第50-56页 |
| 3.3.2 FcSEP1基因编码的蛋白质亚细胞定位和导肽预测 | 第56页 |
| 3.3.3 FcSEP1基因编码蛋白质的二级结构分析 | 第56-57页 |
| 3.3.4 FcSEP1基因编码蛋白质的三级结构分析 | 第57-58页 |
| 3.3.5 FcSEP1蛋白的同源性和进化分析 | 第58-61页 |
| 3.4 FcSEP1在金柑中的表达分析 | 第61-63页 |
| 3.5 金柑花蕾酵母双杂交cDNA文库构建 | 第63-65页 |
| 3.5.1 金柑花蕾总RNA的提取及检测 | 第63页 |
| 3.5.2 双链cDNA(ds cDNA)的合成和纯化 | 第63页 |
| 3.5.3 金柑花蕾cDNA文库质量的鉴定 | 第63-65页 |
| 3.6 酵母双杂交pGBKT7-FcSEP1诱饵载体的构建 | 第65-66页 |
| 3.7 酵母双杂交pGBKT7-FcSEP1诱饵载体的毒性和自激活检测 | 第66-68页 |
| 3.7.1 毒性检测 | 第66-67页 |
| 3.7.2 自激活检测 | 第67-68页 |
| 3.8 酵母双杂交实验 | 第68-70页 |
| 3.9 与FcSEP1互作的候选阳性克隆鉴定 | 第70-72页 |
| 3.9.1 候选阳性克隆菌落PCR及酶切鉴定 | 第70-71页 |
| 3.9.2 阳性候选克隆回转酵母体内一对一回转验证 | 第71-72页 |
| 3.10 与FcSEP1互作的阳性克隆生物信息学分析 | 第72-74页 |
| 3.11 FcSEP1基因植物超量表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 3.12 农杆菌菌落PCR检测 | 第75-76页 |
| 3.13 野生型拟南芥(WT)遗传转化 | 第76-78页 |
| 3.14 根癌农杆菌介导植物超量表达载体对融安金柑的遗传转化 | 第78-81页 |
| 3.14.1 抗性植株的生长过程 | 第78-79页 |
| 3.14.2 抗性芽GUS检测 | 第79-81页 |
| 第四章 讨论 | 第81-87页 |
| 4.1 金柑FcSEP1生物信息学分析和同源性比对 | 第81-82页 |
| 4.2 金柑FcSEP1基因功能初步分析 | 第82页 |
| 4.3 关于酵母双杂交技术 | 第82-84页 |
| 4.3.1 影响cDNA文库质量的关键因素 | 第82-83页 |
| 4.3.2 cDNA文库质量鉴定评价 | 第83页 |
| 4.3.3 酵母双杂交技术的局限性 | 第83-84页 |
| 4.4 遗传转化 | 第84-87页 |
| 4.4.1 金柑FcSEP1基因对拟南芥遗传转化分析 | 第84-85页 |
| 4.4.2 金柑FcSEP1基因对金柑遗传转化分析 | 第85-87页 |
| 第五章 结论与创新性 | 第87-88页 |
| 5.1 结论 | 第87页 |
| 5.2 创新性 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第99页 |
