| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-19页 |
| 第一部分：妊娠期糖尿病SHBG表达及其与PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子的相关性分析 | 第19-38页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-22页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-27页 |
| 3.1 临床样本取材 | 第22页 |
| 3.2 分析妊娠期糖尿病和正常孕妇胎盘中SHBG及PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子mRNA的表达 | 第22-24页 |
| 3.2.1 设计引物 | 第22-23页 |
| 3.2.2 提取RNA | 第23页 |
| 3.2.3 逆转录 | 第23-24页 |
| 3.2.4 REAL-TIMEPCR | 第24页 |
| 3.3 分析妊娠期糖尿病和正常孕妇胎盘中SHBG及PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子蛋白的表达 | 第24-26页 |
| 3.3.1 蛋白样品制备 | 第24页 |
| 3.3.2 蛋白含量测定(BCA法) | 第24-25页 |
| 3.3.3 SDS－PAGE电泳 | 第25页 |
| 3.3.4 转膜 | 第25页 |
| 3.3.5 免疫反应 | 第25-26页 |
| 3.3.6 化学发光,显影,定影 | 第26页 |
| 3.3.7 凝胶图象分析 | 第26页 |
| 3.4 统计学处理 | 第26-27页 |
| 4 结果 | 第27-31页 |
| 4.1 妊娠期糖尿病和正常孕妇胎盘中SHBG及PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子mRNA的表达 | 第27-28页 |
| 4.2 妊娠期糖尿病和正常孕妇胎盘中SHBG及PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子蛋白的表达 | 第28-31页 |
| 4.3 妊娠期糖尿病和正常孕妇胎盘中SHBG与PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子的相关性分析 | 第31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 6 讨论 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 第二部分：建立胎盘滋养层合体细胞胰岛素抵抗细胞模型 | 第38-48页 |
| 1 前言 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第39页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第39页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 3 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.1 HTR8-SVneo细胞培养 | 第39-40页 |
| 3.2 胎盘滋养层细胞胰岛素抵抗最佳作用浓度及时间确定 | 第40页 |
| 3.2.1 检测培养细胞上清液中的葡萄糖含量 | 第40页 |
| 3.2.2 检测人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo细胞存活率 | 第40页 |
| 3.3 胎盘滋养层细胞形态学变化 | 第40-41页 |
| 3.4 胎盘滋养层细胞胰岛素抵抗模型持续时间的研究 | 第41页 |
| 3.5 统计分析 | 第41页 |
| 4 结果 | 第41-44页 |
| 4.1 不同浓度胰岛素对胎盘滋养细胞葡萄糖消耗量的影响 | 第41页 |
| 4.2 不同浓度胰岛素对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo生存率的影响 | 第41-42页 |
| 4.3 10^-7mol/L胰岛素分别作用不同时间后对上清液中葡萄糖含量的影响 | 第42页 |
| 4.4 10^-7mol/L胰岛素浓度作用不同时间后对细胞生存率的影响 | 第42-43页 |
| 4.5 胎盘滋养层细胞胰岛素抵抗模型的稳定性 | 第43页 |
| 4.6 胎盘滋养层胰岛素抵抗模型细胞的形态学变化 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44页 |
| 6 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第三部分：胰岛素抵抗胎盘滋养层合体细胞中SHBG对胰岛素信号转导表达和胰岛素抵抗的影响 | 第48-85页 |
| 1 前言 | 第48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-50页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第48-50页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第48-49页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第49-50页 |
| 3 实验方法 | 第50-55页 |
| 3.1 使用大提质粒试剂盒提取质粒 | 第50页 |
| 3.1.1 质粒 | 第50页 |
| 3.1.2 质粒小提 | 第50页 |
| 3.2 转染 | 第50-51页 |
| 3.2.1 细胞准备 | 第51页 |
| 3.2.2 筛选理想转染浓度及最佳转染持续时间 | 第51页 |
| 3.3 SHBG过表达对HTR8-SVneo细胞中PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子表达影响 | 第51-52页 |
| 3.3.1 用Real-TimePCR及检测SHBG、GLUT1、GLUT3、GLUT4、PI3K、IRS1、IRS2在正常细胞、模型细胞、转染后的各组细胞的表达 | 第52页 |
| 3.3.2 Westernblot | 第52页 |
| 3.4 免疫荧光 | 第52-53页 |
| 3.4.1 实验分组 | 第52页 |
| 3.4.2 细胞荧光免疫步骤 | 第52-53页 |
| 3.5 细胞增殖实验 | 第53页 |
| 3.5.1 实验分组 | 第53页 |
| 3.5.2 实验步骤 | 第53页 |
| 3.6 观察转染过表达SHBG质粒对胰岛素抵抗模型细胞凋亡的影响 | 第53-54页 |
| 3.6.1 实验分组 | 第53页 |
| 3.6.2 凋亡检测 | 第53-54页 |
| 3.7 检测葡萄糖消耗量 | 第54页 |
| 3.7.1 实验分组 | 第54页 |
| 3.7.2 实验步骤 | 第54页 |
| 3.8 统计学处理 | 第54-55页 |
| 4 结果 | 第55-77页 |
| 4.1 提取高纯度DNA质粒 | 第55页 |
| 4.2 转染HTR8-SVneo胰岛素抵抗模型细胞 | 第55-60页 |
| 4.3 SHBG过表达对HTR8-SVneo胰岛素抵抗模型细胞中PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子表达影响 | 第60-67页 |
| 4.3.1 REAL-TIMEPCR | 第60-63页 |
| 4.3.2 Westernbolt检测各组细胞中SHBG及PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子蛋白的表达 | 第63-65页 |
| 4.3.3 在HTR8/SVneo、胰岛素抵抗模型、Z24、Z48组中,SHBG与PI3K/Akt胰岛素抵抗传导通路相关因子的相关性分析 | 第65-67页 |
| 4.4 免疫荧光检测蛋白表达 | 第67-75页 |
| 4.5 转染过表达SHBG质粒对胰岛素抵抗模型的影响 | 第75-76页 |
| 4.6 转染过表达SHBG对胰岛素抵抗模型细胞凋亡的影响 | 第76-77页 |
| 4.7 转染过表达SHBG对胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量的影响 | 第77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 6 讨论 | 第78-82页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
| 创新性评价 | 第85-86页 |
| 综述 | 第86-95页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 在学期间科研成绩 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 个人简介 | 第97页 |
