| 符号说明 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 漆酶的起源 | 第13-14页 |
| 1.2 昆虫漆酶的种类与分布 | 第14页 |
| 1.3 昆虫漆酶的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.4 漆酶分子结构及氧化机理 | 第15-16页 |
| 1.5 昆虫漆酶的分子生物学研究及功能 | 第16-21页 |
| 1.5.1 昆虫漆酶的降解木质素或食物脱毒功能 | 第17-18页 |
| 1.5.2 昆虫漆酶的角质层黑化、硬化、色素沉着功能 | 第18-19页 |
| 1.5.3 昆虫漆酶其他功能 | 第19-20页 |
| 1.5.4 昆虫漆酶酶学特征 | 第20-21页 |
| 1.6 选题意义 | 第21-22页 |
| 1.7 技术路线 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 试虫饲养 | 第23页 |
| 2.2 试剂及仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 小菜蛾总RNA的提取、鉴定及cDNA的合成 | 第24-26页 |
| 2.3.1 小菜蛾总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 小菜蛾总RNA的鉴定 | 第25页 |
| 2.3.2.1 小菜蛾总RNA得率及纯度检测—紫外分光光度法 | 第25页 |
| 2.3.2.2 小菜蛾总RNA完整性鉴定—琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.3.3 小菜蛾第一链cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.4 小菜蛾漆酶2基因(Laccase2)的克隆 | 第26-32页 |
| 2.4.1 小菜蛾Laccase2引物设计 | 第26-27页 |
| 2.4.2 小菜蛾Lac2全长序列的扩增 | 第27-32页 |
| 2.4.2.1 RACE引物设计 | 第27页 |
| 2.4.2.2 5 ’-和3’-RACE | 第27-30页 |
| 2.4.2.3 PCR产物回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.2.4 PCR产物连接转化与克隆测序 | 第31-32页 |
| 2.5 基因序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.5.1 数据库搜索及小菜蛾Lac2基因编码蛋白的理化性质分析 | 第32-33页 |
| 2.5.2 小菜蛾Lac2基因编码蛋白的结构和功能分析 | 第33页 |
| 2.6 小菜蛾不同发育时期漆酶的表达研究 | 第33-34页 |
| 2.7 小菜蛾漆酶酶活测定及底物动力学分析 | 第34-36页 |
| 2.7.1 小菜蛾漆酶的提取 | 第34-35页 |
| 2.7.2 漆酶酶活测定—分光光度计法 | 第35页 |
| 2.7.3 活化能的测定 | 第35页 |
| 2.7.4 铜离子对漆酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-47页 |
| 3.1 小菜蛾总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.2 小菜蛾漆酶2基因的扩增 | 第36-37页 |
| 3.3 小菜蛾漆酶2基因序列的生物信息学分析 | 第37-43页 |
| 3.3.1 小菜蛾漆酶2基因核苷酸序列、氨基酸序列组成和理化性质 | 第37-39页 |
| 3.3.2 小菜蛾Lac2基因氨基酸序列同源性比较及系统进化树的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.3 小菜蛾漆酶基因信号肽、跨膜结构域分析 | 第40-41页 |
| 3.3.4 小菜蛾Lac2基因编码的蛋白二级结构分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5 小菜蛾Lac2基因三级结构模型构建 | 第42-43页 |
| 3.4 小菜蛾不同发育时期漆酶的表达研究 | 第43页 |
| 3.5 小菜蛾漆酶酶学特性 | 第43-47页 |
| 3.5.1 pH对小菜蛾漆酶活力的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.2 温度对小菜蛾漆酶活力的影响 | 第44页 |
| 3.5.3 漆酶动力学参数测定 | 第44-45页 |
| 3.5.4 漆酶催化ABTS氧化反应的活化能(Ea) | 第45页 |
| 3.5.5 Cu2+对漆酶活力的影响 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 小菜蛾漆酶2分子生物学分析 | 第47-48页 |
| 4.2 小菜蛾漆酶2时空分布及表达量分析 | 第48-49页 |
| 4.3 小菜蛾漆酶2酶学特性及外界离子干扰动力学分析 | 第49页 |
| 4.4 对后续研究的思考 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-60页 |
| 7 附录 | 第60-61页 |
| 8 致谢 | 第61-62页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第62页 |
