摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-22页 |
1.1 昆虫免疫 | 第13-21页 |
1.1.1 昆虫系统免疫 | 第13-15页 |
1.1.2 昆虫肠道免疫 | 第15-17页 |
1.1.3 昆虫ROS代谢相关基因的研究 | 第17-19页 |
1.1.4 昆虫抗菌肽研究 | 第19-20页 |
1.1.5 昆虫细胞免疫 | 第20-21页 |
1.2 研究的目的及意义 | 第21-22页 |
第二章 细菌感染诱导家蚕体内活性氧产生及相关基因转录水平的分析 | 第22-37页 |
2.1 实验材料 | 第22页 |
2.1.1 供试昆虫 | 第22页 |
2.1.2 供试菌种 | 第22页 |
2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
2.1.4 主要试剂 | 第22页 |
2.2 实验方法 | 第22-29页 |
2.2.1 家蚕饲养 | 第22-23页 |
2.2.2 细菌培养 | 第23页 |
2.2.3 喂食感染 | 第23页 |
2.2.4 注射感染 | 第23页 |
2.2.5 家蚕解剖 | 第23页 |
2.2.6 中肠及血腔中H_2O_2含量检测 | 第23-25页 |
2.2.7 PCR检测中肠活性氧代谢相关基因 | 第25-29页 |
2.3 结果与分析 | 第29-35页 |
2.3.1 喂食感染后家蚕中肠及血腔中H_2O_2水平 | 第29-30页 |
2.3.2 注射感染后家蚕死亡率及血腔中H_2O_2水平变化 | 第30-32页 |
2.3.3 PCR检测喂食细菌感染后家蚕中肠活性氧代谢相关基因的转录 | 第32-35页 |
2.4 讨论 | 第35-37页 |
第三章 细菌诱导的家蚕中肠免疫反应研究 | 第37-48页 |
3.1 实验材料 | 第37页 |
3.1.1 供试昆虫 | 第37页 |
3.1.2 供试菌种 | 第37页 |
3.1.3 主要仪器 | 第37页 |
3.1.4 主要试剂 | 第37页 |
3.2 实验方法 | 第37-40页 |
3.2.1 家蚕饲养、细菌培养及喂食感染 | 第37页 |
3.2.2 死亡率统计 | 第37页 |
3.2.3 家蚕解剖 | 第37页 |
3.2.4 中肠CFU (colony forming units) 检验 | 第37-38页 |
3.2.5 中肠H_2O_2含量检测 | 第38页 |
3.2.6 荧光实时定量PCR (Real-time quantitative PCR) 检测中肠活性氧代谢相关基因及抗菌肽基因 | 第38-40页 |
3.3 结果与分析 | 第40-46页 |
3.3.1 两种细菌感染后家蚕存活率统计 | 第40页 |
3.3.2 细菌感染后家蚕中肠CFU检验 | 第40-41页 |
3.3.3 细菌感染后家蚕肠道内的H_2O_2及NO水平变化 | 第41-42页 |
3.3.4 荧光实时定量PCR检测活性氧及抗菌肽相关基因 | 第42-46页 |
3.4 讨论 | 第46-48页 |
第四章 家蚕过氧化物酶5的表达、纯化及鉴定 | 第48-68页 |
4.1 实验材料 | 第48-49页 |
4.1.1 供试昆虫 | 第48页 |
4.1.2 供试菌种 | 第48页 |
4.1.3 主要仪器 | 第48页 |
4.1.4 主要试剂 | 第48-49页 |
4.2 实验方法 | 第49-58页 |
4.2.1 家蚕饲养 | 第49页 |
4.2.2 总RNA提取及cDNA合成 | 第49页 |
4.2.3 序列分析 | 第49页 |
4.2.4 BmPrx5的克隆 | 第49-52页 |
4.2.5 家蚕过氧化物酶 5(BmPrx5)的原核表达 | 第52-53页 |
4.2.6 重组蛋白的检测及鉴定 | 第53-56页 |
4.2.7 重组蛋白酶切及纯化 | 第56页 |
4.2.8 目的蛋白(BmPrx5)体外活性检测 | 第56-57页 |
4.2.9 家蚕细菌感染及H2O2处理 | 第57页 |
4.2.10 肠道消化液及血淋巴中的H_2O_2浓度检测 | 第57页 |
4.2.11 荧光实时定量PCR检测各组织中BmPrx5的转录情况 | 第57-58页 |
4.3 结果与分析 | 第58-67页 |
4.3.1 BmPrx5序列分析 | 第58-60页 |
4.3.2 重组蛋白BmPrx5的原核表达及纯化 | 第60-62页 |
4.3.3 BmPrx5的抗氧化活性检测 | 第62-63页 |
4.3.4 H2O2注射后BmPrx5转录水平的变化 | 第63-65页 |
4.3.5 细菌感染后BmPrx5转录水平的变化 | 第65-67页 |
4.4 讨论 | 第67-68页 |
第五章 结论与讨论 | 第68-71页 |
5.1 结论 | 第68页 |
5.2 讨论 | 第68-71页 |
参考文献 | 第71-82页 |
附录 | 第82-85页 |
缩略词 | 第85-87页 |
致谢 | 第87-88页 |
作者简介 | 第88页 |