| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 RE的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 RE的流行病学调查 | 第13-14页 |
| 1.1.2 REV的分子生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 RE的实验室诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.4 RE的预防与治疗 | 第16-17页 |
| 1.2 MD的研究进展 | 第17-23页 |
| 1.2.1 马立克氏病的流行病学调查 | 第17页 |
| 1.2.2 MDV病毒的分子生物学特性 | 第17-19页 |
| 1.2.3 MD的实验室诊断 | 第19-20页 |
| 1.2.4 MD的预防与治疗 | 第20页 |
| 1.2.5 REV对马立克疫苗效果的影响 | 第20-21页 |
| 1.2.6 新型独立自主知识产权的马立克基因缺失疫苗 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 常规分子克隆试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 SPF鸡 | 第23页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 env基因的扩增与纯化(基因扩增产物的回收与纯化) | 第25-26页 |
| 2.2.2 回收env基因PCR产物 | 第26页 |
| 2.2.3 PCR产物与真核表达载体的酶切与连接 | 第26-27页 |
| 2.2.4 提取重组质粒进行酶切鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组质粒转染CEF细胞 | 第28页 |
| 2.2.6 IFA鉴定 | 第28页 |
| 2.2.7 带有kana基因的pUC载体的构建 | 第28页 |
| 2.2.8 基因表达盒与表达载体连接 | 第28-29页 |
| 2.2.9 重组载体的回收(质粒DNA的回收) | 第29页 |
| 2.2.10 质粒转染 | 第29-30页 |
| 2.2.11 IFA鉴定 | 第30页 |
| 2.2.12 带有Meq两侧同源臂的env表达盒以及kana抗性基因的扩增与纯化 | 第30页 |
| 2.2.13 将REV env基因表达盒以及kana抗性基因插入MDV SC9-1基因组meq基因位点 | 第30-31页 |
| 2.2.14 插入meq位点重组病毒的拯救及生物学特性的研究 | 第31-33页 |
| 2.2.15 表达REV env、gp90蛋白的MDV meq位点重组病毒的构建、拯救及鉴定 | 第33-39页 |
| 2.2.16 带有不同启动子真核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3 结果 | 第41-50页 |
| 3.1 表达REV env的重组MDV病毒的构建、拯救、鉴定及生物活性比较 | 第41-46页 |
| 3.1.1 env的扩增与回收 | 第41页 |
| 3.1.2 将env基因、gp90基因与真核表达载体连接及鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.3 扩增带有gp90基因的表达盒 | 第42页 |
| 3.1.4 重组MDV SC9-env在CEF细胞的复制水平 | 第42页 |
| 3.1.5 重组病毒SC9-env对SPF鸡的致病性 | 第42-43页 |
| 3.1.6 重组病毒SC9-env对SPF鸡感染vv MDV rMd5的免疫保护效果 | 第43-46页 |
| 3.2 表达REV env、gp90蛋白的MDV meq位点重组病毒的构建、拯救及鉴定结果 | 第46-49页 |
| 3.2.1 gp90基因的扩增与回收 | 第46页 |
| 3.2.2 将gp90基因与真核表达载体连接及鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.3 插入US10位点的重组病毒的拯救与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.4 相对RT-PCR荧光定量方法比较不同插入位点重组病毒转录REV gp90RNA的水平 | 第48页 |
| 3.2.5 ELISA方法比较携带不同目的基因重组病毒表达蛋白的水平 | 第48-49页 |
| 3.3 不同启动子体外表达env蛋白的水平 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 6 创新点 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第65页 |
