| 摘要 | 第6-8页 |
| SUMMARY | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1 嵴病毒的发现 | 第11页 |
| 2 猪嵴病毒的研究进展 | 第11-14页 |
| 2.1 猪嵴病毒的形态学和基因组结构 | 第11-12页 |
| 2.2 猪嵴病毒的理化特性 | 第12页 |
| 2.3 猪嵴病毒的流行情况 | 第12-13页 |
| 2.3.1 猪嵴病毒的国际流行情况 | 第12页 |
| 2.3.2 猪嵴病毒的国内流行情况 | 第12-13页 |
| 2.4 猪嵴病毒的诊断方法 | 第13页 |
| 2.4.1 病毒的分离培养 | 第13页 |
| 2.4.2 电镜技术 | 第13页 |
| 2.4.3 分子生物学方法 | 第13页 |
| 2.5 猪嵴病毒的防控措施 | 第13-14页 |
| 2.6 猪嵴病毒的研究现状与展望 | 第14页 |
| 3 重组酶聚合酶扩增的研究现状 | 第14-16页 |
| 3.1 RPA技术原理 | 第15页 |
| 3.2 BasicRPA的技术特点 | 第15页 |
| 3.3 LF-RPA的技术特点 | 第15-16页 |
| 3.4 RPA技术的实际应用 | 第16页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 猪嵴病毒阳性标准品制备及BASICRPA快速诊断方法的建立 | 第17-30页 |
| 1 试验材料 | 第17-18页 |
| 1.1 病毒毒株、细胞及质粒 | 第17页 |
| 1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-24页 |
| 2.1 引物设计 | 第18页 |
| 2.2 病毒RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.3 阳性标准品的制备 | 第19-21页 |
| 2.3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的构建 | 第19-21页 |
| 2.4 重组质粒pMD20-T-AH6的提取 | 第21页 |
| 2.5 重组质粒pMD20-T-AH6的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.6 质粒拷贝数的计算 | 第22页 |
| 2.7 BasicRPA反应体系和反应条件的建立 | 第22页 |
| 2.8 BasicRPA反应产物的纯化 | 第22-23页 |
| 2.9 敏感性试验 | 第23页 |
| 2.10 特异性试验 | 第23页 |
| 2.11 BasicRPA反应温度的优化 | 第23页 |
| 2.12 BasicRPA反应时间的优化 | 第23页 |
| 2.13 重复性试验 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-28页 |
| 3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的双酶切鉴定 | 第24页 |
| 3.2 敏感性试验 | 第24-25页 |
| 3.2.1 PKV阳性标准品BasicRPA反应的灵敏性 | 第24-25页 |
| 3.2.2 PKV阳性标准品RT-PCR反应的灵敏性 | 第25页 |
| 3.3 特异性试验 | 第25-26页 |
| 3.4 BasicRPA反应温度的优化 | 第26页 |
| 3.5 BasicRPA反应时间的优化 | 第26-27页 |
| 3.6 重复性试验 | 第27-28页 |
| 3.6.1 批间重复性试验 | 第27页 |
| 3.6.2 批内重复性试验 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 猪嵴病毒LF-RPA快速诊断方法的建立 | 第30-39页 |
| 1 试验材料 | 第30页 |
| 1.1 病毒毒株、细胞及质粒 | 第30页 |
| 1.2 限制性内切酶及其他试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器和设备 | 第30页 |
| 2 试验方法 | 第30-33页 |
| 2.1 引物与探针设计 | 第30-31页 |
| 2.2 病毒RNA的提取 | 第31页 |
| 2.3 阳性标准品的制备 | 第31页 |
| 2.3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的构建 | 第31页 |
| 2.4 重组质粒pMD20-T-AH6的提取 | 第31页 |
| 2.5 重组质粒pMD20-T-AH6的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.6 质粒拷贝数的计算 | 第32页 |
| 2.7 LF-RPA反应体系和反应条件的建立 | 第32页 |
| 2.8 敏感性试验 | 第32-33页 |
| 2.9 特异性试验 | 第33页 |
| 2.10 LF-RPA反应温度的优化 | 第33页 |
| 2.11 LF-RPA反应时间的优化 | 第33页 |
| 2.12 重复性试验 | 第33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的双酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.2 敏感性试验 | 第33-34页 |
| 3.2.1 PKV阳性标准品LF-RPA反应的灵敏性 | 第33-34页 |
| 3.3 LF-RPA特异性试验 | 第34页 |
| 3.4 LF-RPA反应温度的优化 | 第34-35页 |
| 3.5 LF-RPA反应时间的优化 | 第35页 |
| 3.6 重复性试验 | 第35-36页 |
| 3.6.1 批间重复性试验 | 第35-36页 |
| 3.6.2 批内重复性试验 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 第四章 猪嵴病毒RPA检测方法的临床应用 | 第39-43页 |
| 1 试验材料 | 第39页 |
| 1.1 临床样本 | 第39页 |
| 1.2 试剂及仪器 | 第39页 |
| 2 检测方法 | 第39-40页 |
| 2.1 样本处理 | 第39页 |
| 2.2 RNA提取及反转录 | 第39页 |
| 2.3 RPA反应 | 第39页 |
| 2.4 BasicRPA产物电泳检测 | 第39-40页 |
| 2.5 LF-RPA检测 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 导师简介 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54-55页 |
