| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1.1 猪流行性腹泻 | 第14-15页 |
| 1.2 PEDV的流行病学特点 | 第15-16页 |
| 1.2.1 宿主因素 | 第15页 |
| 1.2.2 病毒因素 | 第15-16页 |
| 1.2.3 疫苗因素 | 第16页 |
| 1.2.4 饲养管理与环境因素 | 第16页 |
| 1.3 PEDV的流行病学 | 第16-17页 |
| 1.4 PEDV的分子结构和遗传特征 | 第17-24页 |
| 1.4.0 PEDV的分子结构 | 第17-18页 |
| 1.4.1 5’UTR | 第18-19页 |
| 1.4.2 ORF1 | 第19页 |
| 1.4.3 S蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4.4 ORF3 | 第20-21页 |
| 1.4.5 M蛋白 | 第21-22页 |
| 1.4.6 E蛋白 | 第22页 |
| 1.4.7 N蛋白 | 第22-23页 |
| 1.4.8 3’UTR | 第23页 |
| 1.4.9 PEDV的分子流行病学研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 PEDV的检测方法 | 第24-25页 |
| 1.6 PEDV疫苗的研究 | 第25-27页 |
| 1.6.1 灭活疫苗 | 第25-26页 |
| 1.6.2 弱毒疫苗 | 第26页 |
| 1.6.3 基因工程疫苗 | 第26页 |
| 1.6.4 核酸疫苗 | 第26-27页 |
| 1.6.5 转基因植物疫苗 | 第27页 |
| 1.7 PEDV的临床治疗 | 第27页 |
| 1.8 姜黄素与抗病毒 | 第27-29页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第29-30页 |
| 第3章 材料与方法 | 第30-42页 |
| 3.1 试验材料 | 第30-34页 |
| 3.1.1 病料及实验动物 | 第30页 |
| 3.1.2 细胞与菌株 | 第30页 |
| 3.1.3 载体与质粒 | 第30-31页 |
| 3.1.4 工具酶及主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.5 培养基与抗生素及其配制 | 第31-32页 |
| 3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第32-34页 |
| 3.1.7 分子生物学分析软件 | 第34页 |
| 3.2 试验方法 | 第34-42页 |
| 3.2.1 病料采集与处理 | 第34-35页 |
| 3.2.2 病毒的分离 | 第35页 |
| 3.2.3 PEDV的增殖 | 第35页 |
| 3.2.4 限制性内切酶酶切反应 | 第35页 |
| 3.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第35-36页 |
| 3.2.6 PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第36页 |
| 3.2.7 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第36-37页 |
| 3.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第37页 |
| 3.2.9 连接产物的转化 | 第37页 |
| 3.2.10 质粒的制备与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.11 病毒粒子的电镜观察 | 第39-40页 |
| 3.2.12 病毒滴度的测定 | 第40页 |
| 3.2.13 样品总RNA的提取及cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 3.2.14 统计学方法 | 第41-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-92页 |
| 4.1 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立及流行病学调查 | 第42-43页 |
| 4.1.1 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立 | 第42页 |
| 4.1.2 猪流行性腹泻病毒流行病学调查 | 第42-43页 |
| 4.2 猪流行性腹泻病毒的分离与鉴定 | 第43-47页 |
| 4.2.1 病毒的分离 | 第43-44页 |
| 4.2.2 PEDV AJ1102株病毒毒价的测定 | 第44页 |
| 4.2.3 PEDV AJ1102株病毒形态的电镜观察结果 | 第44-45页 |
| 4.2.4 间接免疫荧光实验(IFA) | 第45-46页 |
| 4.2.5 病毒的RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 4.3 PEDV AJ1102株的全基因组序列的测定与进化分析 | 第47-86页 |
| 4.3.1 PEDV AJ1102株基因片段的RT-PCR扩增 | 第47-48页 |
| 4.3.2 PEDV AJ1102株各扩增片段的测序及序列拼接 | 第48-49页 |
| 4.3.3 PEDV AJ1102株全基因组序列的遗传进化分析 | 第49-52页 |
| 4.3.4 PEDV AJ1102株5’UTR的结构分析 | 第52-54页 |
| 4.3.6 PEDV AJ1102株3’UTR的结构分析 | 第54-56页 |
| 4.3.7 PEDV AJ1102株S蛋白的遗传进化分析 | 第56-67页 |
| 4.3.8 PEDV AJ1102株M蛋白的遗传进化分析 | 第67-72页 |
| 4.3.9 PEDV AJ1102株N蛋白的遗传进化分析 | 第72-75页 |
| 4.3.10 PEDV AJ1102株ORF3的遗传进化分析 | 第75-80页 |
| 4.3.11 PEDV AJ1102株E蛋白的遗传进化分析 | 第80-85页 |
| 4.3.12 PEDV AJ1102株全基因组的同源重组分析 | 第85-86页 |
| 4.4 PEDV流行毒株的遗传标志分析 | 第86-90页 |
| 4.5 中药姜黄素抗PEDV增殖的分析 | 第90-92页 |
| 4.5.1 姜黄素对Vero细胞的毒性试验 | 第90-91页 |
| 4.5.2 姜黄素抗PEDV增殖的分析 | 第91-92页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第92-98页 |
| 5.1 讨论 | 第92-97页 |
| 5.1.1 PEDV RT-PCR检测方法的建立 | 第92页 |
| 5.1.2 PEDV的流行病学调查及AJ1102株的分离鉴定 | 第92-93页 |
| 5.1.3 PEDV AJ102株全基因组序列和S、M、N、ORF3基因序列分析 | 第93-95页 |
| 5.1.4 PEDV AJ1102株的致病性分析 | 第95-96页 |
| 5.1.5 PEDV的毒力相关基因 | 第96页 |
| 5.1.6 中药姜黄素抗PEDV增殖的分析 | 第96-97页 |
| 5.2 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 附录 | 第108页 |
