| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第10-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 1、试剂和抗体 | 第16-17页 |
| 2、主要设备及软件 | 第17页 |
| 3、细胞系和病原体 | 第17-18页 |
| 4、载体、菌株和分子克隆试剂 | 第18页 |
| 5、实验小鼠 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-29页 |
| 1、小鼠原代腹腔巨噬细胞的分离 | 第18-19页 |
| 2、细胞siRNA干扰 | 第19页 |
| 3、总RNA的提取、cDNA的制备和定量PCR | 第19-21页 |
| 4、细胞因子的测定 | 第21-22页 |
| 5、共聚焦显微实验 | 第22页 |
| 6、免疫印迹WesternBlot检测胞内信号分子 | 第22页 |
| 7、免疫共沉淀 | 第22-23页 |
| 8、RNF122 KO小鼠的制备和鉴定 | 第23-25页 |
| 9、流式细胞术 | 第25页 |
| 10、质粒构建 | 第25-26页 |
| 11、细胞质粒转染 | 第26-27页 |
| 12、原核蛋白纯化 | 第27-28页 |
| 13、双荧光素酶报告基因检测 | 第28页 |
| 14. GST-pull down | 第28页 |
| 15、质谱兼容的硝酸银染色 | 第28-29页 |
| 16、统计学分析 | 第29页 |
| 2.3 溶液的配制 | 第29-34页 |
| 1、硫羟乙酸盐肉汤 | 第29页 |
| 2、电泳液 | 第29-30页 |
| 3、IP洗液 | 第30页 |
| 4、磷酸盐缓冲液 | 第30-31页 |
| 5、LB培养基 | 第31页 |
| 6、SDS-PAGE溶液 | 第31页 |
| 7、50~*TAE | 第31-32页 |
| 8、蛋白纯化溶液 | 第32页 |
| 9、GST-Pull down溶液 | 第32-34页 |
| 第三章 结果 | 第34-76页 |
| 3.1 RIG-I与RNF122存在相互作用 | 第34-41页 |
| 1、RNF122与RIG-I存在相互作用 | 第34-35页 |
| 2、RNF122可直接结合RIG-I | 第35-38页 |
| 3、RNF122在免疫器官和免疫细胞中高表达 | 第38-40页 |
| 小结 | 第40-41页 |
| 3.2 RNF122负向调控RNA病毒引起的天然免疫反应 | 第41-59页 |
| 1、RNF122特异性调控RNA病毒引起的天然免疫反应 | 第41-47页 |
| 2、RNF122负向调控RIG-I信号通路的活化 | 第47-49页 |
| 3、RNF122缺失小鼠抗病毒能力增强 | 第49-53页 |
| 4、RNA病毒刺激后RNF122的mRNA与蛋白质表达水平上调 | 第53-56页 |
| 5、RNF122通过自身泛素化途径降解 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 3.3 RNF122促进RIG-I蛋白降解 | 第59-71页 |
| 1、RNF122的TM结构域与RIG-I的CARD结构域相结合 | 第59-62页 |
| 2、RNF122通过增加RIG-I的泛素化修饰促进RIG-I蛋白降解 | 第62-66页 |
| 3、RNF122增强RIG-I的K48多聚泛素化而抑制RIG-I介导的IFN产生 | 第66-68页 |
| 4、RNF122介导CARD K115和K146的多聚泛素化修饰 | 第68-71页 |
| 小结 | 第71页 |
| 3.4 讨论和小结 | 第71-76页 |
| 小结 | 第71页 |
| 讨论 | 第71-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 英文缩略词表 | 第82-84页 |
| 综述 | 第84-94页 |
| References | 第90-94页 |
| 个人简历 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
