| 摘要 | 第9-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-33页 |
| 1 内质网应激（ER Stress）及其介导的信号通路的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.1 ER Stress与未折叠蛋白反应（UPR） | 第22-24页 |
| 1.2 ER Stress介导的信号通路 | 第24-26页 |
| 1.2.1 PERK-e IF2α 介导的UPR信号途径 | 第24-25页 |
| 1.2.2 IRE-1 介导的UPR信号途径 | 第25页 |
| 1.2.3 ATF6转录诱导的UPR信号途径 | 第25-26页 |
| 1.3 钙离子信号通道及其与ER Stress的关系 | 第26页 |
| 2 ER Stress及其介导的信号通路对脂代谢影响的研究进展 | 第26-29页 |
| 2.1 ER Stress通过激活SREBP-1c而直接调控脂类代谢 | 第27-28页 |
| 2.2 ER Stress通过调控脂类代谢相关因子的转录水平影响脂类代谢 | 第28页 |
| 2.3 ER Stress反应通过调节Apo B影响脂类的分泌 | 第28-29页 |
| 3 关于铜对鱼类影响的研究进展 | 第29-31页 |
| 3.1 铜对鱼类的生理及其毒性作用 | 第29-30页 |
| 3.1.1 铜对鱼类的生理作用 | 第29页 |
| 3.1.2 水体铜暴露对鱼类的毒性作用 | 第29-30页 |
| 3.1.3 饲料中铜过量对鱼类的毒副作用 | 第30页 |
| 3.2 铜对鱼类脂代谢的影响 | 第30-31页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第31-33页 |
| 第二章 黄颡鱼和虾虎鱼内质网应激（ER Stress）基因的克隆及组织表达分析 | 第33-63页 |
| 第一节 黄颡鱼ER Stress基因的克隆及组织表达分析 | 第33-50页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-38页 |
| 2.1 实验鱼的饲养及样品采集 | 第34-35页 |
| 2.2 实验试剂 | 第35页 |
| 2.3 GRP78、CRT、PERK、IRE-1α 和ATF-6α 基因c DNA序列的克隆 | 第35-36页 |
| 2.3.1 总RNA的提取及第一链c DNA的合成 | 第35页 |
| 2.3.2 黄颡鱼内质网应激基因c DNA核心序列的克隆及测序 | 第35页 |
| 2.3.3 黄颡鱼内质网应激基因c DNA 3’和 5’末端的克隆及测序 | 第35-36页 |
| 2.4 序列分析 | 第36-37页 |
| 2.5 黄颡鱼内质网应激基因的组织表达分析 | 第37-38页 |
| 2.6 统计分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.1 黄颡鱼内质网应激基因c DNA序列特征 | 第38-39页 |
| 3.2 黄颡鱼内质网应激基因的氨基酸序列特征 | 第39页 |
| 3.3 黄颡鱼内质网应激基因进化分析 | 第39-46页 |
| 3.4 黄颡鱼内质网应激基因的组织表达水平 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 第二节 虾虎鱼ER Stress基因的克隆及组织表达分析 | 第50-63页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-53页 |
| 2.1 实验鱼的饲养及样品采集 | 第50-51页 |
| 2.2 实验试剂 | 第51页 |
| 2.3 c DNA序列的克隆 | 第51页 |
| 2.4 序列分析 | 第51页 |
| 2.5 组织表达分析 | 第51页 |
| 2.6 统计分析 | 第51-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-61页 |
| 3.1 虾虎鱼内质网应激基因的c DNA序列特征 | 第53页 |
| 3.2 虾虎鱼内质网应激基因的氨基酸序列特征 | 第53-54页 |
| 3.3 虾虎鱼内质网应激基因的进化分析 | 第54-60页 |
| 3.4 虾虎鱼内质网应激基因的组织表达水平 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 铜对黄颡鱼和虾虎鱼内质网应激及其介导的信号通路的影响 | 第63-90页 |
| 第一节 水体铜暴露对黄颡鱼内质网超微结构、内质网应激及其介导的信号通路的影响 | 第63-74页 |
| 1 前言 | 第63-65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-68页 |
| 2.1 实验试剂 | 第65页 |
| 2.2 试剂处理 | 第65页 |
| 2.3 实验设计 | 第65-67页 |
| 2.3.1 活体原位实验：水体铜暴露对黄颡鱼内质网及其介导的信号通路的影响 | 第65-66页 |
| 2.3.2 离体实验：铜对黄颡鱼肝细胞内钙离子稳态的影响 | 第66-67页 |
| 2.3.2.1 黄颡鱼原代肝细胞的分离及培养 | 第66-67页 |
| 2.3.2.2 细胞内钙离子的测定 | 第67页 |
| 2.4 样品分析 | 第67-68页 |
| 2.4.1 肝细胞超微结构观察 | 第67页 |
| 2.4.2 基因表达水平分析 | 第67页 |
| 2.4.3 共聚焦荧光显微镜测定细胞内钙离子 | 第67-68页 |
| 2.5 统计分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-72页 |
| 3.1 肝细胞超微结构观察（TEM） | 第68-70页 |
| 3.2 内质网应激相关基因的m RNA表达水平 | 第70-71页 |
| 3.3 细胞内钙离子浓度 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 第二节 饲料铜缺乏和过量对黄颡鱼内质网应激及其介导的信号通路的影响 | 第74-81页 |
| 1 前言 | 第74-75页 |
| 2 材料与方法 | 第75-77页 |
| 2.1 实验试剂 | 第75页 |
| 2.2 饲料配制 | 第75页 |
| 2.3 实验设计及采样 | 第75-76页 |
| 2.4 基因表达水平分析 | 第76-77页 |
| 2.5 统计分析 | 第77页 |
| 3 结果与分析 | 第77-79页 |
| 3.1 肝脏组织中内质网应激相关基因的表达分析 | 第77-78页 |
| 3.2 肌肉组织中内质网应激相关基因的表达水平分析 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 第三节 水体铜暴露对虾虎鱼内质网应激及其介导的信号通路的影响 | 第81-90页 |
| 1 前言 | 第81-82页 |
| 2 材料与方法 | 第82-84页 |
| 2.1 实验试剂 | 第82页 |
| 2.2 试剂处理 | 第82页 |
| 2.3 实验设计 | 第82-83页 |
| 2.3.1 活体原位实验：探究水体暴露对虾虎鱼内质网及介导的信号通路的影响 | 第82-83页 |
| 2.3.2 离体实验：探究铜对虾虎鱼肝细胞内钙离子稳态的影响 | 第83页 |
| 2.3.2.1 原代肝细胞的分离及培养 | 第83页 |
| 2.3.2.2 细胞内钙离子的测定 | 第83页 |
| 2.4 样品分析 | 第83-84页 |
| 2.4.1 基因表达水平分析 | 第83页 |
| 2.4.2 共聚焦荧光显微镜测定细胞内钙离子 | 第83-84页 |
| 2.5 统计分析 | 第84页 |
| 3 结果与分析 | 第84-88页 |
| 3.1 虾虎鱼内质网应激相关基因的m RNA表达水平 | 第84-85页 |
| 3.2 双因素分析 | 第85-86页 |
| 3.3 细胞内钙离子浓度 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-90页 |
| 第四章 内质网应激及其介导的信号通路在铜影响黄颡鱼和虾虎鱼脂肪沉积及代谢中的作用及其机制 | 第90-111页 |
| 第一节 内质网应激及其介导的信号通路在铜影响黄颡鱼脂肪沉积及活化SREBP-1c过程中的作用及部分机制 | 第90-105页 |
| 1 前言 | 第90-92页 |
| 2 材料与方法 | 第92-95页 |
| 2.1 实验试剂 | 第92页 |
| 2.2 试剂处理 | 第92页 |
| 2.3 实验设计 | 第92-93页 |
| 2.3.1 活体原位实验：水体暴露对黄颡鱼肝脏内脂肪沉积及SREBP-1c活化的影响 | 第92-93页 |
| 2.3.2 离体实验：4-PBA对黄颡鱼肝细胞内ER Stress反应的抑制效果及其对脂肪沉积及SREBP-1c通路活化产生的影响 | 第93页 |
| 2.4 样品分析 | 第93-94页 |
| 2.4.1 脂肪和铜含量测定 | 第93页 |
| 2.4.2 肝脏H&E和油红O染色 | 第93页 |
| 2.4.3 FAS活性及TG含量测定 | 第93-94页 |
| 2.4.4 基因表达水平分析 | 第94页 |
| 2.5 统计分析 | 第94-95页 |
| 3 结果与分析 | 第95-102页 |
| 3.1 形态学参数及肝脏铜含量 | 第95-96页 |
| 3.2 肝脏脂肪含量及FAS活性 | 第96-97页 |
| 3.3 肝脏H&E及油红O染色 | 第97-99页 |
| 3.4 基因的m RNA表达水平 | 第99页 |
| 3.5 双因素分析 | 第99-102页 |
| 4 讨论 | 第102-105页 |
| 第二节 内质网应激及其介导的信号通路在铜影响虾虎鱼脂肪沉积及SREBP-1c活化过程中的作用及部分机制 | 第105-111页 |
| 1 前言 | 第105-106页 |
| 2 材料与方法 | 第106-108页 |
| 2.1 实验试剂 | 第106页 |
| 2.2 试剂处理 | 第106页 |
| 2.3 实验设计 | 第106页 |
| 2.4 样品分析 | 第106-107页 |
| 2.4.1 FAS活性及TG含量测定 | 第106页 |
| 2.4.2 基因表达水平分析 | 第106-107页 |
| 2.5 统计分析 | 第107-108页 |
| 3 结果与分析 | 第108-109页 |
| 3.1 肝细胞FAS活性及TG含量 | 第108-109页 |
| 3.2 基因的m RNA表达水平 | 第109页 |
| 4 讨论 | 第109-111页 |
| 全文总结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-130页 |
| 附录 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
