| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第17-24页 |
| 1.1 酵母双杂交技术的基本原理 | 第17-18页 |
| 1.2 酵母双杂交技术的局限性 | 第18-19页 |
| 1.2.1 适用范围的局限性 | 第18页 |
| 1.2.2 假阳性难以避免 | 第18-19页 |
| 1.2.3 假阴性时有发生 | 第19页 |
| 1.2.4 其他方面 | 第19页 |
| 1.3 酵母双杂交技术在寄生虫研究中的应用 | 第19-22页 |
| 1.3.1 球虫 | 第19-20页 |
| 1.3.2 弓形虫 | 第20-21页 |
| 1.3.3 疟原虫 | 第21页 |
| 1.3.4 血吸虫 | 第21-22页 |
| 1.3.5 华支睾吸虫 | 第22页 |
| 1.3.6 细粒棘球绦虫 | 第22页 |
| 1.4 展望 | 第22-24页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第24-40页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.2.2 实验虫株 | 第24页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.5 常用试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体的收集与纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.8 RACE扩增目的基因 5’和 3’末端序列 | 第28-31页 |
| 2.2.9 目的基因开放阅读框的PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.10 目的基因的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 2.2.11 目的基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段转录水平分析 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-39页 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫四个发育阶段虫体的收集和纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.3.3 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因的克隆 | 第35页 |
| 2.3.4 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因的生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 2.3.5 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在虫体四个发育阶段的转录水平分析 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的原核表达及其初步功能研究 | 第40-56页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料和方法 | 第40-48页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第40页 |
| 3.2.2 虫株，载体和细胞 | 第40页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第41页 |
| 3.2.5 常用试剂配制 | 第41-42页 |
| 3.2.6 原核重组表达质粒pCold I-EtSTK的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.7 原核重组表达质粒pCold I-EtSTK表达重组蛋白 | 第43-44页 |
| 3.2.8 原核重组表达质粒pCold I-EtSTK表达重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.9 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶重组蛋白多克隆抗体的制备与纯化 | 第45页 |
| 3.2.10 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶重组蛋白的免疫原性和反应原性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.11 DF-1 细胞的复苏与培养 | 第46页 |
| 3.2.12 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在柔嫩艾美耳球虫子孢子、裂殖子阶段的分布与定位分析 | 第46-47页 |
| 3.2.13 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的蛋白表达水平分析 | 第47-48页 |
| 3.2.14 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶重组蛋白多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1 细胞的体外抑制分析 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-55页 |
| 3.3.1 原核重组表达质粒的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.2 原核重组蛋白的表达及存在形式分析 | 第49-50页 |
| 3.3.3 原核重组蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3.3.4 原核重组蛋白多克隆抗体的制备及纯化 | 第51页 |
| 3.3.5 原核重组蛋白的免疫原性和反应原性分析 | 第51-52页 |
| 3.3.6 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的分布与定位分析 | 第52-54页 |
| 3.3.7 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的蛋白表达水平分析 | 第54页 |
| 3.3.8 体外抑制实验结果 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶蛋白与EtAMA1蛋白相互作用关系的验证 | 第56-67页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 材料和方法 | 第56-61页 |
| 4.2.1 虫株，载体和细胞 | 第56页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第56页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第56-57页 |
| 4.2.4 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶和EtAMA1在柔嫩艾美耳球虫子孢子中的间接免疫荧光共定位 | 第57页 |
| 4.2.5 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因的克隆 | 第57页 |
| 4.2.6 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶重组真核表达质粒的构建 | 第57页 |
| 4.2.7 重组真核表达质粒及pcDNA3.1-flag空质粒转染DF-1 细胞 | 第57-58页 |
| 4.2.8 Western blot鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第58页 |
| 4.2.9 IFA鉴定重组真核表达质粒在DF-1 细胞中的表达情况 | 第58页 |
| 4.2.10 Co-IP验证EtSTK与EtAMA1的相互作用关系 | 第58-59页 |
| 4.2.11 GST Pull-Down验证EtSTK与Et AMA1的相互作用关系 | 第59-61页 |
| 4.3 结果 | 第61-65页 |
| 4.3.1 Et STK与EtAMA1的间接免疫荧光共定位 | 第61页 |
| 4.3.2 Et STK真核重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| 4.3.3 Western Blot验证真核重组质粒在DF-1 细胞中的表达 | 第62-63页 |
| 4.3.4 IFA验证真核重组质粒在DF-1 细胞中的表达 | 第63页 |
| 4.3.5 Co-IP验证EtSTK与EtAMA1的相互作用 | 第63-64页 |
| 4.3.6 GST Pull-Down验证EtSTK与EtAMA1的相互作用 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶重组真核表达质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK的免疫保护效能评价 | 第67-73页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 材料与方法 | 第67-70页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第67页 |
| 5.2.2 实验虫株与载体 | 第67页 |
| 5.2.3 主要实验试剂 | 第67页 |
| 5.2.4 主要实验仪器 | 第67-68页 |
| 5.2.5 相关试剂配制 | 第68页 |
| 5.2.6 重组真核表达质粒pcDNA3.1-flag-EtSTK的大量制备 | 第68-69页 |
| 5.2.7 免疫程序及实验动物分组情况 | 第69-70页 |
| 5.2.8 免疫过程中实验动物的增重变化 | 第70页 |
| 5.2.9 免疫过程中实验动物卵囊产量变化 | 第70页 |
| 5.2.10盲肠病变计分 | 第70页 |
| 5.3 结果 | 第70-71页 |
| 5.3.1 实验动物的增重变化 | 第70-71页 |
| 5.3.2 实验动物卵囊产量变化 | 第71页 |
| 5.3.3 盲肠病变计分 | 第71页 |
| 5.4 讨论 | 第71-73页 |
| 第六章 免疫共沉淀法筛选与Et STK相互作用的DF-1 细胞蛋白 | 第73-78页 |
| 6.1 引言 | 第73页 |
| 6.2 材料与方法 | 第73-75页 |
| 6.2.1 主要实验试剂 | 第73页 |
| 6.2.2 主要实验仪器 | 第73页 |
| 6.2.3 载体和细胞 | 第73页 |
| 6.2.4 Co-IP筛选与EtSTK相互作用的DF-1 细胞蛋白 | 第73-74页 |
| 6.2.5 与Et STK作用宿主细胞蛋白的shotgun质谱分析 | 第74-75页 |
| 6.3 结果 | 第75-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第七章 全文总结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85-86页 |
