| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-22页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第11-12页 |
| 1.2 格尔德霉素 | 第12-16页 |
| 1.2.1 格尔德霉素 | 第12-14页 |
| 1.2.2 格尔德霉素及其类似物作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.3 格尔德霉素的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.3 LuxR家族调控蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 MarR家族调控蛋白 | 第17-19页 |
| 1.5 转录组测序 | 第19-21页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 菌株,质粒及其培养条件 | 第22-23页 |
| 2.2 化学试剂及酶 | 第23-24页 |
| 2.3 引物 | 第24页 |
| 2.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2.5 菌株发酵及产物的萃取和分析 | 第24-25页 |
| 2.6 化合物分离纯化 | 第25-26页 |
| 2.7 almRⅠ和almRⅡ基因敲除突变株的互补 | 第26-31页 |
| 2.7.1 互补质粒的构建 | 第26-30页 |
| 2.7.2 接合转移 | 第30-31页 |
| 2.8 RT-PCR | 第31-34页 |
| 2.9 Real-time PCR | 第34-36页 |
| 2.10 转录组测序 | 第36-37页 |
| 2.11 突变株的构建 | 第37-39页 |
| 2.11.1 设计基因敲除长引物 | 第37页 |
| 2.11.2 PCR扩增基因敲除抗性盒子 | 第37页 |
| 2.11.3 PCR-targeting方法构建突变粘粒 | 第37-38页 |
| 2.11.4 自溶链霉菌中构建突变 | 第38-39页 |
| 第三章 结果 | 第39-80页 |
| 3.1 almRⅠ和almRⅡ突变株发酵产物的分析及分离纯化 | 第39-49页 |
| 3.1.1 almRⅠ和almRⅡ突变株发酵产物的分析 | 第39-44页 |
| 3.1.2 almRⅠ和almRⅡ突变株发酵产物的分离纯化 | 第44-45页 |
| 3.1.3 almRⅠ和almRⅡ突变株胞内胞外发酵产物的分析 | 第45-49页 |
| 3.2 almRⅠ和almRⅡ基因敲除突变株的互补 | 第49-51页 |
| 3.3 almRⅠ和almRⅡ不同发酵阶段在野生型菌株中的表达 | 第51-53页 |
| 3.4 格尔德霉素生物合成相关基因在almRⅠ和almRⅡ突变株中的表达 | 第53-55页 |
| 3.5 转录组测序分析almRⅠ和almRⅡ突变株中基因表达的变化 | 第55-72页 |
| 3.5.1 数据质控及De novo组装 | 第55-57页 |
| 3.5.2 Unigene功能注释 | 第57-61页 |
| 3.5.3 野生型、almRⅠ突变株和almRⅡ突变株差异表达基因检测 | 第61-65页 |
| 3.5.4 野生型、almRⅠ突变株和almRⅡ突变株差异表达基因聚类分析 | 第65-66页 |
| 3.5.5 差异表达基因GO功能分析 | 第66-68页 |
| 3.5.6 差异表达基因Pathway功能分析 | 第68-72页 |
| 3.6 orf17突变株的构建及分析 | 第72-80页 |
| 3.6.1 在大肠杆菌中构建突变粘粒 | 第75-77页 |
| 3.6.2 在自溶链霉菌中构建orf17突变 | 第77页 |
| 3.6.3 orf17突变株发酵产物的分析 | 第77-80页 |
| 第四章 讨论 | 第80-85页 |
| 4.1 almRⅠ和almRⅡ突变株发酵产物的分析及化合物分离纯化 | 第80页 |
| 4.2 almRⅠ和almRⅡ基因敲除的互补 | 第80-81页 |
| 4.3 不同发酵时间段almRⅠ和almRⅡ在野生型中的表达 | 第81页 |
| 4.4 格尔德霉素生物合成相关基因在almRⅠ和almRⅡ突变株中的表达 | 第81-82页 |
| 4.5 转录组测序分析almRⅠ和almRⅡ突变株中基因表达的变化 | 第82-83页 |
| 4.6 orf17突变株构建及发酵产物分析 | 第83页 |
| 4.7 总结与展望 | 第83-85页 |
| 附录一 试剂及培养基配方 | 第85-88页 |
| 附录二 引物 | 第88-91页 |
| 附录三 序列 | 第91-96页 |
| 附录四 实验仪器 | 第96-97页 |
| 附录五 脂肪酸及次级代谢产物通路相关的Unigenes分析 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
