| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 结核分枝杆菌概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 结核分枝杆菌病原学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 结核分枝杆菌流行病学 | 第11-12页 |
| 1.2 结核分枝杆菌双组分调控系统 | 第12-17页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌双组分调控系统概述 | 第12-14页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌双组分调控系统KdpD/E研究进展 | 第14-17页 |
| 2 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 3.1.1 菌株、质粒载体和细胞 | 第18页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第18-19页 |
| 3.1.3 培养基及抗生素的配制 | 第19-20页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第20-23页 |
| 3.1.5 引物 | 第23-25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-39页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 3.2.2 同源重组载体的构建 | 第25-29页 |
| 3.2.3 高滴度噬菌体裂解液的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.4 噬菌体感染待敲除菌株以及基因缺失株的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.5 基因缺失株生长特性的研究 | 第31-32页 |
| 3.2.6 THP-1 细胞入侵实验和胞内存活实验 | 第32-33页 |
| 3.2.7 KdpE蛋白的原核表达及纯化 | 第33-36页 |
| 3.2.8 兔抗KdpE蛋白多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| 3.2.9 结核分枝杆菌总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.2.10 荧光定量PCR | 第37-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-52页 |
| 4.1 同源重组载体的构建 | 第39-42页 |
| 4.1.1 pYUB1471重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| 4.1.2 phAE159重组质粒的构建 | 第40-42页 |
| 4.2 基因缺失株的鉴定 | 第42-44页 |
| 4.3 基因缺失株生长特性的研究 | 第44-45页 |
| 4.3.1 生长曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 4.3.2 菌落形态的比较 | 第45页 |
| 4.4 THP-1 细胞入侵实验和胞内存活实验 | 第45-46页 |
| 4.5 KdpE蛋白的原核表达及纯化 | 第46-48页 |
| 4.5.1 pET-28a-kdp E重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 4.5.2 KdpE蛋白的诱导表达及纯化 | 第47-48页 |
| 4.6 兔抗KdpE蛋白多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
| 4.7 结核分枝杆菌总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.8 荧光定量PCR检测差异表达基因 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-55页 |
| 5.1 结核分枝杆菌基因缺失方法的探讨 | 第52页 |
| 5.2 KdpD/E的缺失对结核分枝杆菌生长特性的影响 | 第52-53页 |
| 5.3 KdpD/E的缺失对结核分枝杆菌在感染巨噬细胞过程中的影响 | 第53页 |
| 5.4 反应调节蛋白KdpE的表达和多克隆抗体的制备 | 第53-54页 |
| 5.5 KdpD/E的缺失对结核分枝杆菌重要功能基因的影响 | 第54-55页 |
| 6 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
