| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 古菌概述 | 第12-14页 |
| 1.2 硫化叶菌概述 | 第14页 |
| 1.3 古菌遗传操作系统 | 第14-17页 |
| 1.3.1 冰岛硫化叶菌过表达系统 | 第15页 |
| 1.3.2 冰岛硫化叶菌基因敲除系统 | 第15-17页 |
| 1.4 绿色荧光蛋白 | 第17-21页 |
| 1.4.1 绿色荧光蛋白概述 | 第17-19页 |
| 1.4.2 eCGP123概述 | 第19-21页 |
| 1.5 古菌同源重组修复蛋白HerA、NurA及其同系物 | 第21-26页 |
| 1.5.1 DNA的损伤及其修复 | 第21-22页 |
| 1.5.2 古菌同源重组修复蛋白HerA与NurA | 第22-24页 |
| 1.5.3 HerA-NurA同系物 | 第24-26页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 eCGP123基因的优化、蛋白表达与性质鉴定 | 第28-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 eCGP123基因的优化与合成 | 第28页 |
| 2.1.3 eCGP123表达质粒的构建 | 第28-29页 |
| 2.1.4 大肠杆菌DH5α和BL21-CodonPlus(DE3)-RIL感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.1.5 冰岛硫化叶菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.1.6 大肠杆菌和冰岛硫化叶菌中表达质粒的转化及过表达菌株的筛选和鉴定 | 第29-30页 |
| 2.1.7 目的蛋白的表达、纯化与分析 | 第30-31页 |
| 2.1.8 eCGP123热稳定性、聚集性和吸光值分析 | 第31-32页 |
| 2.1.9 eCGP123在大肠杆菌和冰岛硫化叶菌细胞中的荧光观察 | 第32页 |
| 2.1.10 eCGP123过表达对冰岛硫化叶菌细胞生长的影响 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-45页 |
| 2.2.1 eCGP123基因的优化与合成 | 第32-33页 |
| 2.2.2 eCGP123表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.3 eCGP123在大肠杆菌中的表达、纯化与性质鉴定 | 第34-38页 |
| 2.2.4 eCGP123在冰岛硫化叶菌中的过表达、荧光检测和菌株的生长曲线测定 | 第38-45页 |
| 2.3 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 eCGP123在冰岛硫化叶菌蛋白定位中的初步研究与应用 | 第46-70页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-48页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.2 eCGP123融合蛋白表达质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.3 大肠杆菌和冰岛硫化叶菌中过表达质粒的转化及过表达菌株的筛选和鉴定 | 第47页 |
| 3.1.4 eCGP123融合蛋白的表达、纯化与分析 | 第47-48页 |
| 3.1.5 eCGP123融合蛋白在大肠杆菌和冰岛硫化叶菌细胞中的荧光定位 | 第48页 |
| 3.1.6 eCGP123融合蛋白过表达对冰岛硫化叶菌细胞生长的影响 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-68页 |
| 3.2.1 eCGP123融合蛋白表达质粒的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.2 eCGP123-FtsZ在大肠杆菌中的表达、纯化和分析 | 第50-53页 |
| 3.2.3 eCGP123融合蛋白在冰岛硫化叶菌中的表达与鉴定 | 第53-56页 |
| 3.2.4 eCGP123融合蛋白在冰岛硫化叶菌细胞中的荧光定位 | 第56-64页 |
| 3.2.5 eCGP123融合蛋白过表达对冰岛硫化叶菌细胞生长的影响 | 第64-68页 |
| 3.3 本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 冰岛硫化叶菌中herA-nurA同系物基因的敲除及必需性分析 | 第70-81页 |
| 4.1 材料与方法 | 第70-72页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第70-71页 |
| 4.1.2 herA-nurA同系物基因敲除载体的构建 | 第71页 |
| 4.1.3 冰岛硫化叶菌中敲除载体的电转化和敲除菌株的筛选 | 第71页 |
| 4.1.4 冰岛硫化叶菌基因组DNA的提取 | 第71-72页 |
| 4.1.5 herA-nurA同系物基因敲除菌株的鉴定 | 第72页 |
| 4.1.6 herA-nurA同系物基因敲除对冰岛硫化叶菌细胞生长的影响 | 第72页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第72-79页 |
| 4.2.1 herA-nurA同系物基因敲除设计 | 第72-73页 |
| 4.2.2 herA-nurA同系物基因敲除载体的构建 | 第73-74页 |
| 4.2.3 herA-nurA同系物基因敲除菌株的筛选和鉴定 | 第74-78页 |
| 4.2.4 herA-nurA同系物基因敲除对冰岛硫化叶菌细胞生长的影响 | 第78-79页 |
| 4.3 本章小结 | 第79-81页 |
| 第五章 总结与展望 | 第81-85页 |
| 5.1 总结 | 第81-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-92页 |
| 附录一 本文所涉及的培养基 | 第85-88页 |
| 附录二 本文所用引物和质粒 | 第88-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附件 | 第98页 |
