| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 癌症的免疫治疗 | 第11-14页 |
| 1.1.1 细胞因子抗肿瘤免疫治疗 | 第11-12页 |
| 1.1.2 单克隆抗体抗肿瘤免疫治疗 | 第12页 |
| 1.1.3 肿瘤细胞疫苗 | 第12-13页 |
| 1.1.4 多肽疫苗 | 第13页 |
| 1.1.5 肿瘤基因疫苗 | 第13-14页 |
| 1.2 表皮生长因子及其受体与肿瘤的关系 | 第14-15页 |
| 1.3 以EGF/EGFR为靶点的抗肿瘤药物研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 小分子RNA干扰 | 第16页 |
| 1.3.2 小分子酪氨酸激酶抑制剂 | 第16-17页 |
| 1.3.3 单克隆抗体 | 第17-18页 |
| 1.3.4 EGF疫苗 | 第18-19页 |
| 1.4 免疫联合治疗 | 第19-20页 |
| 1.5 DNA SHUFFLING改组肿瘤抗原 | 第20-22页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 实验材料和方法 | 第23-39页 |
| 2.1 材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.4 实验菌株、细胞株、重组蛋白与佐剂 | 第24页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法： | 第26-39页 |
| 2.2.0 人、鼠、鸡EGF基因的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.1 扩增人、鼠、鸡EGF基因 | 第27页 |
| 2.2.2 DNaseⅠ酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.3 DNA Shuffling改组人、小鼠、鸡EGF基因 | 第28-29页 |
| 2.2.4 目的片段的获取 | 第29页 |
| 2.2.5 质粒的构建和转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 转化子的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.7 重组小鼠EGF和人EGF蛋白的构建和表达 | 第31页 |
| 2.2.8 菌体蛋白免疫诱导高效价抗体的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.9 重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.10 重组蛋白免疫抗肿瘤活性的筛选 | 第33-34页 |
| 2.2.11 重组蛋白抗肿瘤免疫效果的研究 | 第34-35页 |
| 2.2.12 目的转化子质粒测序及同源性分析 | 第35页 |
| 2.2.13 抗体特异性检测 | 第35-36页 |
| 2.2.14 重组EGF与VEGF联合免疫 | 第36-38页 |
| 2.2.15 MTT法检测抗血清对 4T1乳腺癌细胞增殖的影响 | 第38页 |
| 2.2.16 数据分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-65页 |
| 3.1 重组转化子的构建 | 第39-41页 |
| 3.2 转化子的筛选 | 第41-44页 |
| 3.2.1 菌落PCR筛选结果 | 第41-42页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE筛选 | 第42-43页 |
| 3.2.3 转化子动物实验初筛 | 第43-44页 |
| 3.3 免疫抗瘤活性初筛 | 第44-48页 |
| 3.3.1 转化子蛋白纯化 | 第44-45页 |
| 3.3.2 免疫抗瘤效果筛选重组蛋白 | 第45-48页 |
| 3.4 重组蛋白的免疫抗瘤效果 | 第48-51页 |
| 3.5 抗体特异性检测 | 第51-52页 |
| 3.6 重组蛋白的同源性比对 | 第52-53页 |
| 3.7 重组EGF蛋白疫苗和重组VEGF蛋白疫苗联合免疫治疗 | 第53-63页 |
| 3.8 抗血清体外抗瘤效果的测定 | 第63-65页 |
| 4 结论与讨论 | 第65-69页 |
| 4.1 结论 | 第65页 |
| 4.2 讨论 | 第65-68页 |
| 4.3 创新点 | 第68-69页 |
| 5 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
