| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 木聚糖酶的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 木聚糖的结构和功能 | 第15-16页 |
| 1.1.2 木聚糖酶的酶解作用机制 | 第16页 |
| 1.1.3 木聚糖酶的应用进展 | 第16-17页 |
| 1.1.4 木聚糖酶的克隆和表达 | 第17-18页 |
| 1.1.4.1 天然野生型微生物表达 | 第17-18页 |
| 1.1.4.2 重组型微生物表达 | 第18页 |
| 1.1.5 木聚糖酶的研究进展趋势 | 第18-19页 |
| 1.2 微生物细胞表面展示系统 | 第19-22页 |
| 1.2.1 微生物细胞表面展示的概念 | 第19-20页 |
| 1.2.2 微生物细胞表面展示的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.3 酶的利用与微生物细胞表面展示结合的优势 | 第22页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验所需质粒与菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第24页 |
| 2.1.3 实验主要用酶和试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基及实验常用缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.5 交联木聚糖平板的制备 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 PCR扩增目的基因 | 第26-27页 |
| 2.2.1.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| 2.2.1.3 目的基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.1.4 重组质粒的验证 | 第28页 |
| 2.2.2 绿色荧光蛋白-木聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 SDS-PAGE验证蛋白表达 | 第28-29页 |
| 2.2.2.2 时间对绿色荧光蛋白-木聚糖酶在大肠杆菌上清和菌体中的表达量的影响 | 第29页 |
| 2.2.3 绿色荧光蛋白-木聚糖酶在大肠杆菌中的分布 | 第29-30页 |
| 2.2.4 绿色荧光蛋白-木聚糖酶的细胞表面展示测定 | 第30页 |
| 2.2.5 目的蛋白的纯化 | 第30页 |
| 2.2.5.1 亲和纯化 | 第30页 |
| 2.2.5.2 分子筛纯化 | 第30页 |
| 2.2.6 分子标签的酶切 | 第30-31页 |
| 2.2.7 Bradford法测定蛋白浓度 | 第31页 |
| 2.2.8 木聚糖酶酶活力的测定 | 第31-33页 |
| 2.2.8.1 DNS法测还原糖原理和酶活单位的定义 | 第31-32页 |
| 2.2.8.2 木糖标准曲线的绘制 | 第32页 |
| 2.2.8.3 木聚糖酶活力的测定 | 第32页 |
| 2.2.8.4 试样酶活力的计算 | 第32-33页 |
| 2.2.9 菌体酶学性质的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.9.1 菌体最适反应温度的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.2 菌体反应最适反应pH的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.3 菌体热稳定的测定 | 第33页 |
| 2.2.9.4 菌体酸碱耐受性的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.9.5 金属离子对菌体活性的影响 | 第34页 |
| 2.2.10 绿色荧光蛋白-木聚糖酶酶学性质的测定 | 第34-36页 |
| 2.2.10.1 绿色荧光蛋白-木聚糖酶反应最适温度的测定 | 第34页 |
| 2.2.10.2 绿色荧光蛋白-木聚糖酶反应最适反应pH的测定 | 第34页 |
| 2.2.10.3 绿色荧光蛋白-木聚糖酶热稳定的测定 | 第34页 |
| 2.2.10.4 绿色荧光蛋白-木聚糖酶酸碱耐受性的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.10.5 金属离子对绿色荧光蛋白-木聚糖酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-49页 |
| 3.1 木聚糖酶的分子克隆 | 第36-37页 |
| 3.2 绿色荧光蛋白-木聚糖酶在大肠杆菌中的表达 | 第37-39页 |
| 3.3 绿色荧光蛋白-木聚糖酶在大肠杆菌中的分布情况 | 第39页 |
| 3.4 绿色荧光蛋白-木聚糖酶大肠杆菌的表面展示 | 第39-40页 |
| 3.5 木聚糖酶的纯化 | 第40-42页 |
| 3.5.1 亲和柱层析 | 第40-41页 |
| 3.5.2 分子筛(suerdex75)层析 | 第41页 |
| 3.5.3 分子标签酶切 | 第41-42页 |
| 3.6 菌体的酶学性质分析 | 第42-45页 |
| 3.6.1 反应温度对菌体酶活的影响 | 第43页 |
| 3.6.2 反应pH对菌体酶活的影响 | 第43-44页 |
| 3.6.3 菌体的热稳定性 | 第44页 |
| 3.6.4 菌体的酸碱耐受性 | 第44-45页 |
| 3.6.5 金属离子对菌体酶活的影响 | 第45页 |
| 3.7 绿色荧光蛋白-木聚糖酶酶学性质 | 第45-49页 |
| 3.7.1 反应温度对绿色荧光蛋白-木聚糖酶酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.7.2 反应pH对绿色荧光蛋白-木聚糖酶酶活的影响 | 第46-47页 |
| 3.7.3 绿色荧光蛋白-木聚糖酶的热稳定 | 第47页 |
| 3.7.4 绿色荧光蛋白-木聚糖酶的酸碱耐受性 | 第47-48页 |
| 3.7.5 金属离子对绿色荧光蛋白-木聚糖酶酶活的影响 | 第48-49页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第49-51页 |
| 4.1 讨论 | 第49-50页 |
| 4.2 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
