| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 基底节钙化 | 第13-14页 |
| 1.1.1 基底节钙化的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 已知的致病基因 | 第13-14页 |
| 1.2 Ⅲ型钠磷转运蛋白 | 第14-17页 |
| 1.2.1 磷转运蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Pit2及Pit1的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Pit2及Pit1的表达位置 | 第16页 |
| 1.2.4 Pit2及Pit1在果蝇中的同源基因 | 第16-17页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统 | 第17-21页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统及其在果蝇应用中的发展 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的工作原理 | 第18-19页 |
| 1.3.3 DSB的修复 | 第19-20页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9系统的延伸应用 | 第20-21页 |
| 1.4 蛋白质组织表达位置的检测方法 | 第21-23页 |
| 1.5 黑腹果蝇的简介 | 第23-25页 |
| 1.5.1 果蝇的基础知识 | 第23-24页 |
| 1.5.2 果蝇作为模式生物研究基因功能的优势 | 第24-25页 |
| 1.6 本课题开展的目的及意义 | 第25-26页 |
| 第2章 材料与方法 | 第26-36页 |
| 2.1 果蝇品系 | 第26页 |
| 2.2 immunostaining和western blotting所使用的抗体 | 第26-27页 |
| 2.3 利用CRISPR/Cas9系统构建原位表达dPit:GFP的果蝇品系 | 第27-33页 |
| 2.3.1 实验中使用的载体 | 第27-28页 |
| 2.3.2 实验中使用的引物 | 第28-29页 |
| 2.3.3 sgRNA的设计和合成 | 第29页 |
| 2.3.4 sgRNA表达载体及用于同源重组修复的donor质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.4.1 sgRNA表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.4.2 同源重组修复donor质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.5 果蝇胚胎的显微注射 | 第31页 |
| 2.3.6 转基因果蝇的鉴定和品系的建立 | 第31-33页 |
| 2.3.6.1 sgRNA转基因果蝇的鉴定和品系的建立 | 第31-32页 |
| 2.3.6.2 dPit:GFP果蝇株的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.6.3 dPit:GFP果蝇品系的建立 | 第32-33页 |
| 2.4 Western blot | 第33-34页 |
| 2.5 组织免疫染色 | 第34-36页 |
| 第3章 实验结果 | 第36-42页 |
| 3.1 获得能够内源性表达sgRNA的质粒pCDF3-sgRNA | 第36-37页 |
| 3.2 获得用于同源重组修复的donor质粒 | 第37-38页 |
| 3.3 获得能够稳定表达sgRNA的转基因果蝇 | 第38-39页 |
| 3.4 GFP编码序列成功插入到了dPit的阅读框中 | 第39-40页 |
| 3.5 dPit:GFP融合蛋白功能正常且GFP正常工作 | 第40-42页 |
| 第4章 讨论 | 第42-44页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统在基因定向编辑中的应用 | 第42-43页 |
| 4.2 dPit:GFP果蝇株中dPit功能正常 | 第43页 |
| 4.3 dPit的表达位置 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
