| 中文摘要 | 第3-7页 |
| abstract | 第7-11页 |
| 中英文缩略词语 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-24页 |
| 第一部分 FAT10通过Cav-3保护心肌细胞对抗凋亡 | 第24-61页 |
| 一、材料与方法 | 第24-34页 |
| 1.实验动物 | 第24页 |
| 2.动物实验所需设备及仪器 | 第24-25页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第25-34页 |
| 3.1 主要试剂 | 第25-27页 |
| 3.2 主要试剂配置 | 第27-34页 |
| 二、实验方法 | 第34-51页 |
| 1.乳鼠原代心肌细胞的分离与培养 | 第34-35页 |
| 2.缺氧处理模拟心梗损伤 | 第35页 |
| 3.透射性电子显微镜 | 第35-36页 |
| 4.心肌细胞Tunel染色 | 第36-38页 |
| 5.大鼠心梗模型构建(冠状动脉左前降支结扎术) | 第38-40页 |
| 5.1 气管插管 | 第38-39页 |
| 5.2 冠状动脉左前降支结扎术 | 第39-40页 |
| 6.细胞流式术 | 第40页 |
| 7.原代心肌细胞的蛋白提取和蛋白分离提纯 | 第40-41页 |
| 8.BCA蛋白浓度的测定 | 第41页 |
| 9.WesternBlot | 第41-43页 |
| 10.蛋白质印记抗体标记与显色 | 第43页 |
| 11.心肌细胞的免疫共沉淀反应 | 第43-44页 |
| 12.心肌细胞RNA提取和测定 | 第44-45页 |
| 13.逆转录PCR合成cDNA | 第45页 |
| 14.实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第45-46页 |
| 15.细胞免疫荧光 | 第46-47页 |
| 16.慢病毒载体的选择和构建 | 第47-48页 |
| 17.干扰片段的选择和构建 | 第48-49页 |
| 18.TTC染色 | 第49-50页 |
| 19.统计学分析 | 第50-51页 |
| 三、实验结果 | 第51-59页 |
| 1.心梗模型构建 | 第51页 |
| 2.心梗术后大鼠心肌组织内Cav-3及FAT10表达变化 | 第51-52页 |
| 3.缺氧处理对NRCMs内Cav-3及FAT10表达的影响 | 第52-53页 |
| 4.沉默Cav-3导致缺氧刺激后NRCMs凋亡增加 | 第53-54页 |
| 5.NRCMs中FAT10调控Cav-3蛋白表达 | 第54-55页 |
| 6.过表达FAT10抑制缺氧诱导NRCMs细胞凋亡 | 第55-57页 |
| 7.FAT10通过调控Cav-3表达介导心梗后心肌细胞凋亡 | 第57-59页 |
| 四、讨论 | 第59-60页 |
| 五、结论 | 第60-61页 |
| 第二部分 FAT10敲除增加心梗后心肌细胞凋亡 | 第61-86页 |
| 一、材料与方法 | 第61-68页 |
| 1.实验动物及实验细胞 | 第61页 |
| 2.实验所需设备及仪器 | 第61-62页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第62-68页 |
| 二、实验方法 | 第68-78页 |
| 1.PCR鉴定FAT10-KOSD大鼠基因型 | 第68-70页 |
| 2.Westernblot | 第70-72页 |
| 3.大鼠心脏标本处理及病理切片制作 | 第72页 |
| 4.免疫组织化学染色(HE和Masson染色) | 第72-73页 |
| 5.组织免疫荧光 | 第73-74页 |
| 6.心肌组织RNA提取和测定 | 第74-75页 |
| 7.逆转录PCR合成cDNA | 第75-76页 |
| 8.实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第76-77页 |
| 9.免疫组化 | 第77页 |
| 10.统计学分析 | 第77-78页 |
| 三、实验结果 | 第78-84页 |
| 1.FAT10敲除(FAT10-KO)大鼠模型构建及鉴定 | 第78-79页 |
| 2.大鼠一般生理状况 | 第79-80页 |
| 3.FAT10敲除导致心梗面积增加 | 第80-81页 |
| 4.FAT10敲除加重心梗后心肌损伤 | 第81页 |
| 5.FAT10-KO大鼠心梗术后心脏中小窝数量减少 | 第81-82页 |
| 6.FAT10-KO大鼠心梗术后心肌细胞凋亡增加 | 第82页 |
| 7.FAT10通过调控Cav-3表达介导心梗后心肌细胞凋亡 | 第82-84页 |
| 四、讨论 | 第84-85页 |
| 五、结论 | 第85-86页 |
| 第三部分 FAT10通过拮抗泛素化稳定Cav-3表达 | 第86-109页 |
| 一、材料与方法 | 第86-90页 |
| 1.实验细胞 | 第86页 |
| 2.主要实验设备及仪器 | 第86-87页 |
| 3.主要试剂及其配置 | 第87-90页 |
| 二、实验方法 | 第90-98页 |
| 1.HEK293T、H9C2细胞的复苏、换液、传代和冻存 | 第90-92页 |
| 2.Cav-3质粒片段扩增和纯化 | 第92-93页 |
| 3.HEK293T细胞的瞬时转染 | 第93页 |
| 4.细胞蛋白的提取及分离 | 第93-94页 |
| 5.BCA蛋白浓度的测定 | 第94页 |
| 6.Westernblot | 第94-95页 |
| 7.蛋白质印记抗体标记与显色 | 第95-96页 |
| 8.GST-Pulldown实验 | 第96-97页 |
| 9.考马斯亮蓝染色法 | 第97页 |
| 10.统计学方法 | 第97-98页 |
| 三、实验结果 | 第98-107页 |
| 1.心肌细胞中Cav-3蛋白可被泛素修饰 | 第98-99页 |
| 2.明确Cav-3蛋白与Ub结合位点 | 第99-100页 |
| 3.证实Cav-3通过UPS降解 | 第100-101页 |
| 4.FAT10通过抑制泛素化稳定NRCMsCav-3蛋白表达 | 第101-104页 |
| 5.FAT10竞争结合Cav-3泛素结合位点 | 第104-105页 |
| 6.FAT10拮抗Cav-3泛素化影响其表达 | 第105-107页 |
| 四、讨论 | 第107-108页 |
| 五、结论 | 第108-109页 |
| 全文总结 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第119-120页 |
| 综述 | 第120-136页 |
| 参考文献 | 第130-136页 |
