| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-35页 |
| 1.1 PRRSV的基因组结构与复制机制 | 第13-16页 |
| 1.2 | 第16-20页 |
| 1.2.1 PRRSV非结构蛋白及其功能 | 第16-18页 |
| 1.2.2 PRRSV结构蛋白及其功能 | 第18-20页 |
| 1.3 PRRSV感染与宿主天然免疫 | 第20-24页 |
| 1.4 PI3K/AKT/GSK-3信号通路 | 第24-30页 |
| 1.4.1 PI3K结构及其生物学功能 | 第25-27页 |
| 1.4.2 Akt通路及其生物学功能 | 第27-29页 |
| 1.4.3 PI3K/Akt通路与PRRSV感染 | 第29-30页 |
| 1.5 天然免疫限制性因子SAMHD1与病毒感染 | 第30-34页 |
| 1.5.1 SAMHD1的结构与生物学特性 | 第31-32页 |
| 1.5.2 SAMHD1功能与病毒感染 | 第32-34页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 PRRSV逃逸外界选择压力的研究 | 第35-57页 |
| 2.1 病毒和细胞 | 第36-45页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第36页 |
| 2.1.2 抗体和试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.3 病毒感染和抑制剂处理 | 第37-38页 |
| 2.1.4 抑制剂细胞毒性实验 | 第38页 |
| 2.1.5 总RNA的提取与cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 2.1.6 细胞裂解和Western blot分析 | 第39-40页 |
| 2.1.7 HuN4-F112株GSK-3抑制剂突变株的筛选 | 第40-41页 |
| 2.1.8 重组突变病毒的构建与拯救 | 第41-42页 |
| 2.1.9 重组突变病毒的拯救 | 第42-43页 |
| 2.1.10 重组拯救病毒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 2.1.11 重组病毒间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第44页 |
| 2.1.12 重组拯救病毒生物学特性分析 | 第44-45页 |
| 2.2 结果 | 第45-53页 |
| 2.2.1 GSK-3 inhibitor X对细胞活性的影响 | 第45页 |
| 2.2.2 GSK-3的活性与PRRSV的增殖密切相关 | 第45-47页 |
| 2.2.3 HuN4-F112株GSK-3抑制剂突变株的筛选 | 第47-49页 |
| 2.2.4 重组病毒Genomic Marker检测 | 第49-50页 |
| 2.2.5 间接免疫荧光鉴定结果 | 第50页 |
| 2.2.6 重组拯救病毒生长特性分析 | 第50-51页 |
| 2.2.7 重组拯救病毒增强Akt的磷酸化水平 | 第51-53页 |
| 2.3 讨论 | 第53-57页 |
| 第三章 SAMHD1表达调控机制研究 | 第57-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 3.1.1 细胞和病毒 | 第59页 |
| 3.1.2 质粒、抗体和试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.3 Real-time PCR定量分析SAMHD1基因mRNA和细胞IFN-α的表达 | 第60-61页 |
| 3.1.4 细胞处理与转染 | 第61-62页 |
| 3.1.5 荧光素酶活性检测 | 第62页 |
| 3.1.6 RNA干扰与回补实验 | 第62-63页 |
| 3.1.7 间接免疫荧光实验 | 第63页 |
| 3.1.8 染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第63-64页 |
| 3.1.9 凝胶迁移电泳(EMSA) | 第64页 |
| 3.1.10 统计学分析 | 第64页 |
| 3.2 结果 | 第64-78页 |
| 3.2.1 MARC-145细胞和PAM细胞中干扰素上调SAMHD1的表达 | 第64-66页 |
| 3.2.2 HP-PRRSV感染诱导PAM细胞中SAMHD1蛋白和mRNA水平上调 | 第66-67页 |
| 3.2.3 TLR3和RIG-I通路参与上调SAMHD1的表达 | 第67-68页 |
| 3.2.4 过表达TRIF和MAVS诱导SAMHD1的表达 | 第68-70页 |
| 3.2.5 TBK1的活化参与SAMHD1的诱导表达 | 第70-72页 |
| 3.2.6 IRF3在SAMHD1转录翻译过程中发挥直接的调控作用 | 第72-73页 |
| 3.2.7 SAMHD1上调表达不依赖于JAK-STAT通路 | 第73-75页 |
| 3.2.8 IRF3的磷酸化和核转移活性对诱导SAMHD1的上调表达至关重要 | 第75-77页 |
| 3.2.9 活化的IRF3直接结合SAMHD1的启动子诱导SAMHD1的上调表达 | 第77-78页 |
| 3.3 讨论 | 第78-82页 |
| 第四章 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
