| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 p57Kip2在DNA损伤应激反应中的研究 | 第16-28页 |
| 1.1.1 p57Kip2的研究现状 | 第16页 |
| 1.1.2 p57Kip2的基因定位及结构 | 第16-18页 |
| 1.1.3 p57Kip2转录活性的调节 | 第18-19页 |
| 1.1.4 p57Kip2蛋白的结构及其功能 | 第19-21页 |
| 1.1.5 p57Kip2调节细胞凋亡和衰老的作用机制 | 第21-22页 |
| 1.1.6 p57Kip2在肿瘤发生中的作用 | 第22页 |
| 1.1.7 p57Kip2在小鼠发育中的作用 | 第22-24页 |
| 1.1.8 DNA损伤应激反应通路 | 第24-27页 |
| 1.1.9 DNA损伤药物的研究现状 | 第27-28页 |
| 1.2 | 第28-34页 |
| 1.2.0 阿霉素在肿瘤化疗中引发心脏毒性的分子机制 | 第28-30页 |
| 1.2.1 PLN在心脏中的调节作用 | 第30-31页 |
| 1.2.2 课题研究意义 | 第31-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-40页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 实验肿瘤样本 | 第34页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第34-35页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第35-37页 |
| 2.1.5 分析工具软件及网址 | 第37页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第37-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-50页 |
| 2.2.1 小鼠尾巴DNA的提取方法和小鼠基因型PCR鉴定方法 | 第40-45页 |
| 2.2.2 琼脂糖核酸电泳 | 第45-46页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶回收纯化DNA | 第46-47页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第47页 |
| 2.2.5 乙醇沉淀DNA | 第47-48页 |
| 2.2.6 DNA酶切 | 第48页 |
| 2.2.7 目的片段与载体的连接 | 第48-49页 |
| 2.2.8 感受态细胞的制备 | 第49页 |
| 2.2.9 转化 | 第49-50页 |
| 2.3 | 第50-61页 |
| 2.3.0 DNA重组子的筛选和鉴定 | 第50页 |
| 2.3.1 细胞及组织中总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.3.2 RNA的反转录及c DNA合成 | 第51页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR实验 | 第51-52页 |
| 2.3.4 荧光素酶报告基因检测实验 | 第52-53页 |
| 2.3.5 染色质免疫共沉淀（Ch IP）实验 | 第53-58页 |
| 2.3.6 蛋白质免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| 2.3.7 原代小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的分离和培养 | 第59-60页 |
| 2.3.8 小鼠原代心肌细胞的提取方法 | 第60-61页 |
| 2.3.9 细胞转染质粒及Si RNA | 第61页 |
| 2.4 | 第61-68页 |
| 2.4.0 细胞系的复苏及培养 | 第61-62页 |
| 2.4.1 细胞冻存 | 第62页 |
| 2.4.2 病毒包装和目的细胞的侵染 | 第62-63页 |
| 2.4.3 细胞或组织总蛋白的提取和Western-blot检测 | 第63-67页 |
| 2.4.4 细胞克隆形成实验 | 第67页 |
| 2.4.5 细胞活性WST检测 | 第67页 |
| 2.4.6 细胞周期检测 | 第67页 |
| 2.4.7 细胞增殖Brdu检测 | 第67-68页 |
| 2.4.8 细胞免疫荧光染色 | 第68页 |
| 2.4.9 细胞衰老实验 | 第68页 |
| 2.5 | 第68-71页 |
| 2.5.0 MEFs细胞裸鼠成瘤实验 | 第68-69页 |
| 2.5.1 HCT116细胞裸鼠成瘤实验 | 第69页 |
| 2.5.2 化疗药物Dox对不同基因型缺失的细胞瘤的影响 | 第69页 |
| 2.5.3 裸鼠肿瘤Ki67免疫组化研究 | 第69-70页 |
| 2.5.4 原代直肠癌细胞的提取 | 第70页 |
| 2.5.5 统计学处理 | 第70-71页 |
| 第三章 实验结果 | 第71-144页 |
| 3.1 p57Kip2在DNA损伤应激中的调节机制及其在肿瘤发生和化疗中的作用 | 第71-130页 |
| 3.1.1 利用DNA微矩阵研究发现p57Kip2在DNA损伤应激中被上调 | 第71-74页 |
| 3.1.2 p57Kip2在MEFs细胞中被多种DNA损伤药物诱导表达上调 | 第74-77页 |
| 3.1.3 p57Kip2的转录和翻译不受癌基因c-Myc和Ras（V12）的影响 | 第77-78页 |
| 3.1.4 Dox诱导的p57Kip2的表达早于p21Cip1 | 第78-79页 |
| 3.1.5 Dox诱导的p57Kip2表达影响p21Cip1的蛋白水平 | 第79-80页 |
| 3.1.6 Dox诱导的p57Kip2表达上调依赖于Atm但是不需要p53和Chk2 | 第80-86页 |
| 3.1.7 DNA损伤上调p57Kip2依赖于BMP-Smad1通路 | 第86-92页 |
| 3.1.8 DNA损伤诱导的p57Kip2上调需要Tak1-p38MAPK信号通路 | 第92-100页 |
| 3.1.9 p38MAPK-Atf2在DNA损伤应答中参与了p57Kip2的诱导 | 第100-105页 |
| 3.1.10 Smad1和Atf2形成一个复合物在遗传毒性压力下调节p57Kip2的表达 | 第105-109页 |
| 3.1.11 p57Kip2敲除可以促进细胞增殖 | 第109页 |
| 3.1.12 p57Kip2敲除时加入Dox作用后细胞的存活率降低 | 第109-110页 |
| 3.1.13 p57Kip2在Dox处理后使得细胞阻滞在G1/S期 | 第110-112页 |
| 3.1.14在p53敲除后研究p57Kip2的功能 | 第112-114页 |
| 3.1.15 p57Kip2可以抑制细胞的转化不依赖于p53 | 第114-116页 |
| 3.1.16 p57Kip2在缺失的情况下不会引起细胞衰老 | 第116-119页 |
| 3.1.17 p57Kip2敲除促进裸鼠肿瘤的形成 | 第119-121页 |
| 3.1.18 化疗药物Dox对不同基因型缺失的细胞瘤的影响 | 第121-122页 |
| 3.1.19 荷瘤裸鼠肿瘤Ki67和HE染色免疫组化研究 | 第122-123页 |
| 3.1.20 原代直肠癌细胞对化疗药物Dox敏感性的研究 | 第123-125页 |
| 3.1.21 原代直肠癌样本中p57Kip2蛋白及m RNA表达量的检测 | 第125-130页 |
| 3.2 PLN在肿瘤化疗中的调节作用 | 第130-144页 |
| 3.2.1 阿霉素对野生型小鼠生存率的影响 | 第130-131页 |
| 3.2.2 注射 3.5 mg/kg的阿霉素后，Pln-/-小鼠的生存率与野生型组相比显著升高 | 第131页 |
| 3.2.3 注射 5.5 mg/kg的阿霉素后，Pln-/-小鼠的生存率与野生型组相比明显升高 | 第131-132页 |
| 3.2.4 注射 7.5 mg/kg的阿霉素后，Pln-/-小鼠的生存率与野生型组相比无明显差异 | 第132页 |
| 3.2.5 Atm可以调节阿霉素对小鼠生存率的影响 | 第132-134页 |
| 3.2.6 p53不能调节阿霉素对小鼠生存率的影响 | 第134页 |
| 3.2.7 PLN对于阿霉素导致心肌形态学改变的作用 | 第134-136页 |
| 3.2.8 PLN对于阿霉素导致心肌病理形态学改变的作用 | 第136-137页 |
| 3.2.9 阿霉素处理原代小鼠心肌细胞后Mdm2m RNA插入序列的研究 | 第137-138页 |
| 3.2.10 阿霉素处理原代心肌细胞后插入序列测序的生物信息学分析 | 第138-140页 |
| 3.2.11 Hu处理原代心肌细胞后没有发现Mdm2选择性剪接 | 第140页 |
| 3.2.12 ITU处理原代心肌细胞插入序列的现象 | 第140-141页 |
| 3.2.13 蒽环类药物处理原代心肌细胞后插入序列的现象 | 第141页 |
| 3.2.14 用蛋白激酶抑制剂处理MEF细胞后研究Mdm2选择性剪接表达的变化 | 第141-143页 |
| 3.2.15 阿霉素引起的Mdm2选择性剪接在不同基因型小鼠模型中的研究 | 第143-144页 |
| 第四章 实验结论 | 第144-146页 |
| 4.1 p57Kip2在DNA损伤应激中的调节机制及其在肿瘤发生和化疗中的作用 | 第144-145页 |
| 4.2 PLN在肿瘤化疗中的调节作用 | 第145-146页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第146-151页 |
| 5.1 p57Kip2在DNA损伤应激中的调节机制及其在肿瘤发生和化疗中的作用 | 第146-149页 |
| 5.2 PLN在肿瘤化疗中的调节作用 | 第149-151页 |
| 参考文献 | 第151-171页 |
| 附录I 英文缩写表 | 第171-172页 |
| 博士期间发表文章 | 第172-173页 |
| 致谢 | 第173页 |
