| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 环氧氯丙烷简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 环氧氯丙烷的性质和用途 | 第12页 |
| 1.1.2 环氧氯丙烷的生产方法 | 第12-14页 |
| 1.1.2.1 丙烯高温氯化法 | 第13页 |
| 1.1.2.2 醋酸丙烯酯法 | 第13页 |
| 1.1.2.3 甘油法 | 第13-14页 |
| 1.1.3 国内外的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 手性环氧氯丙烷的生产方法 | 第15-19页 |
| 1.2.1 化学法 | 第15页 |
| 1.2.2 Salen手性催化剂的水解动力学拆分法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 生物催化法 | 第16-19页 |
| 1.2.3.1 以外消旋环氧氯丙烷为底物的生物法合成 | 第17页 |
| 1.2.3.2 以二氯丙醇为底物的生物法合成 | 第17-19页 |
| 1.3 环氧化物水解酶 | 第19-25页 |
| 1.3.1 环氧化物水解酶的结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 环氧化物水解酶的催化反应机理 | 第20-21页 |
| 1.3.3 环氧化物水解酶的基因工程研究 | 第21-24页 |
| 1.3.3.1 环氧化物水解酶基因的克隆表达与改造 | 第21-23页 |
| 1.3.3.3 存在的问题 | 第23-24页 |
| 1.3.5 环氧化物水解酶的应用 | 第24-25页 |
| 1.3.6 展望 | 第25页 |
| 1.4 本论文的研究内容 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-32页 |
| 第二章 产环氧化物水解酶基因工程菌的构建及其表达 | 第32-48页 |
| 2.1 引言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料和方法 | 第33-39页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第33页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 试剂 | 第33页 |
| 2.2.2.2 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.3 培养基 | 第34页 |
| 2.2.4 EH在大肠杆菌中的表达 | 第34-38页 |
| 2.2.4.1 质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.4.2 双酶切体系的建立 | 第35页 |
| 2.2.4.3 胶回收酶切片段 | 第35-36页 |
| 2.2.4.4 胶回收产物与pET-28b的连接 | 第36页 |
| 2.2.4.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.4.6 连接产物的转化 | 第37页 |
| 2.2.4.7 重组质粒的筛选及鉴定 | 第37页 |
| 2.2.4.8 EH基因的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.2.5 重组EH的酶活检测 | 第38页 |
| 2.2.6 环氧氯丙烷的定量分析方法 | 第38-39页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第39-46页 |
| 2.3.1 EH基因序列的合成及分析 | 第39-44页 |
| 2.3.1.1 EH基因序列的合成 | 第39-40页 |
| 2.3.1.2 序列比对 | 第40-42页 |
| 2.3.1.3 同源模拟和分子对接 | 第42-44页 |
| 2.3.2 环氧化物水解酶在大肠杆菌中的表达 | 第44-46页 |
| 2.3.2.1 重组表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.3.2.2 重组EH酶活力的测定 | 第45-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第三章 重组手性环氧化物水解酶的分离纯化 及酶学性质表征 | 第48-65页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 材料与方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 菌种与培养基 | 第48-49页 |
| 3.2.2 主要仪器和试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.3 菌种的制备 | 第50页 |
| 3.2.4 重组EH的分离纯化 | 第50-51页 |
| 3.2.5 分析方法 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第52-63页 |
| 3.3.1 EH的分离纯化 | 第52-54页 |
| 3.3.2 EH的酶学性质 | 第54-63页 |
| 3.3.2.1 pH对酶活性的影响 | 第54页 |
| 3.3.2.2 pH稳定性 | 第54-55页 |
| 3.3.2.3 温度对酶活性的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.2.4 酶的温度稳定性 | 第56-57页 |
| 3.3.2.5 金属离子对酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.2.6 表面活性剂对酶活力的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.2.7 反应动力学 | 第59-60页 |
| 3.3.2.8 环氧氯丙烷的拆分动力学过程 | 第60-61页 |
| 3.3.2.9 底物特异性 | 第61-63页 |
| 3.4 本章小结 | 第63页 |
| 参考文献 | 第63-65页 |
| 第四章 环氧化物水解酶产生菌E.coli培养条件优化 | 第65-82页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 材料与方法 | 第65-67页 |
| 4.2.1 菌种 | 第65-66页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第66页 |
| 4.2.3 培养基 | 第66页 |
| 4.2.4 培养方法 | 第66页 |
| 4.2.5 分析方法 | 第66-67页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第67-80页 |
| 4.3.1 种子液生长过程曲线及种龄的确定 | 第67页 |
| 4.3.2 摇瓶发酵培养基及诱导条件优化 | 第67-80页 |
| 4.3.2.1 葡萄糖浓度的优化 | 第67-69页 |
| 4.3.2.2 氮源优化 | 第69-72页 |
| 4.3.2.2.1 有机氮源优化 | 第69-71页 |
| 4.3.2.2.2 无机氮源优化 | 第71-72页 |
| 4.3.2.3 金属离子 | 第72-73页 |
| 4.3.2.4 乳糖诱导量条件优化 | 第73-74页 |
| 4.3.2.5 培养基中磷酸盐浓度的优化 | 第74-75页 |
| 4.3.2.6 诱导时机条件优化 | 第75-76页 |
| 4.3.2.7 诱导时间条件优化 | 第76页 |
| 4.3.2.8 摇瓶发酵培养基的确定 | 第76-80页 |
| 4.3.2.9 验证试验 | 第80页 |
| 4.4 本章小结 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-85页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
