| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1. 新城疫病毒概述 | 第13页 |
| 2. NDV毒力的评价指标 | 第13-14页 |
| 3. 病毒的入侵机制与毒力 | 第14-15页 |
| 4. 病毒的复制与毒力 | 第15-16页 |
| 5. 病毒免疫逃避机制与毒力 | 第16页 |
| 6. 病毒非编码区基序与毒力 | 第16-17页 |
| 7. 新城疫病毒反向遗传操作技术概述 | 第17-23页 |
| 7.1 NDV全基因组cDNA的克隆构建 | 第17-18页 |
| 7.2 辅助质粒功能验证的必要性 | 第18-19页 |
| 7.3 反向遗传技术在NDV毒力机制解析方面的应用 | 第19-20页 |
| 7.4 反向遗传技术在NDV作为疫苗载体方面的应用 | 第20-23页 |
| 第二章 新城疫病毒La Sota C5株反向遗传平台的改造与优化 | 第23-34页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1 毒株、细胞株和鸡胚 | 第23页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第23页 |
| 1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3.1 主要分子生物学试剂 | 第23-24页 |
| 1.3.2 培养基和主要化学试剂 | 第24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 1.5 分子生物学软件 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-29页 |
| 2.1 毒株的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2 病毒RNA的提取及反转录 | 第25页 |
| 2.3 目的片段的聚合酶链式反应(PCR扩增) | 第25-26页 |
| 2.4 T-A克隆及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5 全长基因组cDNA转录载体的构建 | 第27页 |
| 2.6 全长感染性克隆的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.7 TVT-G La Sota C5的拯救 | 第28-29页 |
| 2.8 拯救病毒的HA测定 | 第29页 |
| 2.9 拯救病毒的RT-PCR验证 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-31页 |
| 3.1 T-A克隆及测序分析结果 | 第29-30页 |
| 3.2 重构建转录载体TVT-GLa Sota C5的酶切鉴定 | 第30页 |
| 3.3 TVT-GLa Sota C5株的拯救及PT-PCR产物鉴定结果 | 第30页 |
| 3.4 TVT-GLa Sota C5株的生物学特性分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 嵌合新城疫Class Ⅰ/Class Ⅱ弱毒疫苗候选株的构建 | 第34-43页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| 1.1 病毒、细胞和鸡胚 | 第35页 |
| 1.2 菌株、质粒和载体 | 第35页 |
| 1.3 常用试剂 | 第35-36页 |
| 1.4 主要仪器 | 第36页 |
| 1.5 主要化学试剂和细菌培养基 | 第36页 |
| 1.6 1%鸡红细胞悬液 | 第36页 |
| 1.7 分子生物学软件 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| 2.1 三基因替换重组转录载体TVT-GLa Sota C5M/F/HN的构建 | 第36-37页 |
| 2.1.1 引物的设计与合成 | 第37页 |
| 2.1.2 M/F/HN基因的扩增和克隆测序 | 第37页 |
| 2.2 TVT-GLa Sota C5中引入Ⅰ酶切位点Pac Ⅰ和ASCⅡ | 第37-38页 |
| 2.3 重组转录载体TVT-GLa Sota C5M/F/HN的构建模式 | 第38-39页 |
| 2.4 重组质粒TVT-GLa Sota C5M/F/HN的的酶切鉴定 | 第39页 |
| 2.5 三基因替换的重组转录载体的转染及鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6 重组病毒的部分生物学特性测定 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-41页 |
| 3.1 三基因替换重组转录载体TVT-GLa Sota C5M/F/HN的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 TVT-GLa Sota C5M/F/HN的拯救与鉴定 | 第41页 |
| 3.3 拯救病毒与母本病毒的部分生物学特性比较 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 嵌合Class Ⅰ/Class Ⅱ弱毒疫苗候选株的免疫原性比较 | 第43-54页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44-46页 |
| 1.2.1 病毒扩增保存 | 第44页 |
| 1.2.2 病毒EID_(50)测定 | 第44页 |
| 1.2.3 病毒TCID_(50)测定 | 第44页 |
| 1.2.4 兔抗新城疫高免血清制备 | 第44-45页 |
| 1.2.5 交叉血凝抑制试验 | 第45页 |
| 1.2.6 交叉中和试验 | 第45-46页 |
| 1.2.7 交叉保护试验 | 第46页 |
| 1.2.8 统计分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-51页 |
| 2.1 病毒扩增及特性鉴定 | 第46-47页 |
| 2.2 交叉血凝抑制结果 | 第47页 |
| 2.3 交叉中和结果 | 第47-49页 |
| 2.4 交叉保护结果 | 第49-51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| 第五章 两种新城疫弱毒疫苗诱导黏膜免疫应答的比较 | 第54-68页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-58页 |
| 2.1 病毒扩增保存 | 第55页 |
| 2.2 病毒EID_(50)测定 | 第55页 |
| 2.3 两株弱毒感染鸡的组织病理检查 | 第55-56页 |
| 2.4 黏膜免疫试验设计 | 第56页 |
| 2.5 黏膜免疫样品采集方法 | 第56-57页 |
| 2.6 间接ELISA方法的建立 | 第57-58页 |
| 2.6.1 ELISA包被抗原的制备 | 第57页 |
| 2.6.2 最佳抗原包被浓度和最佳酶标抗体工作浓度的确定 | 第57页 |
| 2.6.3 样品最佳稀释度的确定 | 第57页 |
| 2.6.4 间接ELISA检测步骤 | 第57-58页 |
| 2.7 数据统计与分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-65页 |
| 3.1 两株弱毒的体内增殖比较 | 第58-59页 |
| 3.2 最佳抗原包被浓度和酶标抗体工作浓度确定 | 第59页 |
| 3.3 确定间接ELISA方法最佳反应条件 | 第59页 |
| 3.4 唾液中抗体水平 | 第59-60页 |
| 3.5 气管冲洗液中抗体水平 | 第60-62页 |
| 3.6 肺冲洗液中抗体水平 | 第62页 |
| 3.7 肠冲洗液中抗体水平 | 第62-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 全文总结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第90-91页 |
