| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 α-乳白蛋白研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 牛αS1-酪蛋白5'调控序列研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 β-半乳糖苷酶研究进展 | 第17-22页 |
| 1.4 乳腺上皮细胞的分离培养和应用研究进展 | 第22-24页 |
| 1.5 转基因技术改善乳成分研究进展 | 第24-28页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-49页 |
| 2.1 牛αS1-酪蛋白5'调控序列的获取 | 第29-32页 |
| 2.1.1 材料和仪器 | 第29页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.1.3 牛αS1-酪蛋白5'调控序列的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.1.4 克隆载体αS1-T-2的构建 | 第31-32页 |
| 2.2 人α-乳白蛋白cDNA的获取 | 第32页 |
| 2.3 真核表达载体的构建 | 第32-37页 |
| 2.3.1 材料和仪器 | 第32-33页 |
| 2.3.2 单基因真核表达载体LA-cDNA-psv的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.3 双基因真核表达载体αS1-LA-psv的构建 | 第34-37页 |
| 2.4 牛乳腺上皮细胞的培养、纯化和鉴定 | 第37-39页 |
| 2.4.1 材料和仪器 | 第37-38页 |
| 2.4.2 牛乳腺上皮细胞的培养和纯化 | 第38页 |
| 2.4.3 牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.5 细胞转染及表达产物检测 | 第39-45页 |
| 2.5.1 材料和仪器 | 第39-40页 |
| 2.5.2 双基因真核表达载体αS1-LA-psv转染牛乳腺上皮细胞及表达产物检测 | 第40-45页 |
| 2.5.3 单基因真核表达载体LA-cDNA-psv转染牛乳腺上皮细胞及表达产物检测 | 第45页 |
| 2.6 奶牛乳腺转染及表达结果检测 | 第45-48页 |
| 2.6.1 材料和仪器 | 第45-46页 |
| 2.6.2 双基因真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺组织 | 第46页 |
| 2.6.3 转染后牛乳中乳糖含量变化检测 | 第46-48页 |
| 2.6.4 转染后牛乳产量变化检测 | 第48页 |
| 2.7 数据处理 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-67页 |
| 3.1 牛αS1-酪蛋白5'调控序列的获取 | 第49-50页 |
| 3.1.1 牛αS1-酪蛋白5'调控序列的PCR扩增 | 第49页 |
| 3.1.2 克隆载体αS1-T-2的双酶切鉴定及测序 | 第49-50页 |
| 3.2 人α-乳白蛋白cDNA序列的获取 | 第50-53页 |
| 3.3 真核表达载体的鉴定 | 第53-55页 |
| 3.3.1 单基因真核表达载体LA-cDNA-psv的鉴定 | 第53页 |
| 3.3.2 双基因真核表达载体αS1-LA-psv的鉴定 | 第53-55页 |
| 3.4 奶牛乳腺上皮细胞的培养、纯化和鉴定 | 第55-57页 |
| 3.4.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养和纯化 | 第55-56页 |
| 3.4.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.5 细胞转染及表达产物的检测 | 第57-64页 |
| 3.5.1 单基因真核表达载体LA-cDNA-psv转染牛乳腺上皮细胞及表达产物的检测 | 第57页 |
| 3.5.2 双基因真核表达载体αS1-LA-psv转染牛乳腺上皮细胞及表达产物的检测 | 第57-64页 |
| 3.6 奶牛乳腺转染及表达结果的检测 | 第64-67页 |
| 3.6.1 转染后牛乳中乳糖含量变化的检测 | 第64-65页 |
| 3.6.2 转染后牛乳产量变化的检测 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-75页 |
| 4.1 目的基因序列的获取 | 第67-69页 |
| 4.1.1 牛αS1-酪蛋白5'调控序列的选择利获取 | 第67-68页 |
| 4.1.2 人α-乳白蛋白基因cDNA的获取 | 第68-69页 |
| 4.2 真核表达载体的构建 | 第69页 |
| 4.3 奶牛乳腺上皮细胞的培养 | 第69-71页 |
| 4.4 细胞转染及表达产物的检测 | 第71-72页 |
| 4.4.1 转染条件的确定 | 第71-72页 |
| 4.4.2 β-半乳糖苷酶的检测 | 第72页 |
| 4.4.3 人α-乳白蛋白的检测 | 第72页 |
| 4.5 奶牛乳腺转染及乳糖含量和乳产量变化的检测 | 第72-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 附录 | 第87-90页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第90页 |
