| 内容提要 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-11页 |
| ABSTRACT | 第11-18页 |
| 第1章 绪论 | 第25-49页 |
| 1.1 基因治疗的研究进展及发展前景 | 第25-29页 |
| 1.1.1 基因治疗的定义及应用 | 第25页 |
| 1.1.2 基因治疗面临的技术问题和挑战 | 第25-26页 |
| 1.1.3 基因治疗导入系统研究进展 | 第26-28页 |
| 1.1.4 基因治疗的前景展望 | 第28-29页 |
| 1.2 肿瘤基因治疗研究进展 | 第29-32页 |
| 1.2.1 肿瘤基因治疗原理及分类 | 第29-32页 |
| 1.2.2 肿瘤基因治疗面临的挑战 | 第32页 |
| 1.3 溶瘤腺病毒与肿瘤治疗 | 第32-36页 |
| 1.3.1 腺病毒基本特性 | 第33页 |
| 1.3.2 腺病毒载体的发展 | 第33-34页 |
| 1.3.3 条件复制型腺病毒载体 | 第34-36页 |
| 1.3.4 条件复制型腺病毒与肿瘤治疗 | 第36页 |
| 1.4 肿瘤基因-放射治疗 | 第36-43页 |
| 1.4.1 肿瘤基因-放射治疗种类 | 第36-40页 |
| 1.4.2 肿瘤基因放射治疗的辐射增敏机制 | 第40-41页 |
| 1.4.3 Egr-1介导的肿瘤基因-放射治疗研究进展 | 第41-43页 |
| 1.5 Smac基因与肿瘤 | 第43-48页 |
| 1.5.1 Smac的分子特性及结构特征 | 第44页 |
| 1.5.2 Smac的促凋亡作用 | 第44-45页 |
| 1.5.3 Smac与肿瘤的关系 | 第45-48页 |
| 1.5.4 Smac的研究前景 | 第48页 |
| 1.6 立题依据 | 第48-49页 |
| 第2章 材料与方法 | 第49-73页 |
| 2.1 主要试剂及器材 | 第49-51页 |
| 2.1.1 试剂 | 第49-51页 |
| 2.1.2 器材 | 第51页 |
| 2.2 主要仪器 | 第51-52页 |
| 2.3 质粒与菌株 | 第52页 |
| 2.4 细胞株 | 第52页 |
| 2.5 照射条件 | 第52-53页 |
| 2.6 细胞生物学实验方法 | 第53-55页 |
| 2.6.1 培养液配制 | 第53页 |
| 2.6.2 胎牛血清制备 | 第53页 |
| 2.6.3 D-Hanks液的配制 | 第53页 |
| 2.6.4 胰酶的配制 | 第53页 |
| 2.6.5 细胞培养 | 第53-54页 |
| 2.6.6 细胞冻存 | 第54页 |
| 2.6.7 细胞复苏 | 第54页 |
| 2.6.8 敏感肿瘤细胞株筛选 | 第54页 |
| 2.6.9 细胞增殖检测 | 第54页 |
| 2.6.10 细胞凋亡检测 | 第54-55页 |
| 2.6.11 细胞mRNA表达水平检测 | 第55页 |
| 2.6.12 细胞蛋白表达水平检测 | 第55页 |
| 2.7 分子生物学实验方法 | 第55-71页 |
| 2.7.1 细菌培养技术 | 第55-58页 |
| 2.7.2 重组穿梭载体的构建 | 第58-64页 |
| 2.7.3 重组腺病毒的包装与鉴定 | 第64-67页 |
| 2.7.4 目的基因表达 | 第67-71页 |
| 2.8 统计学方法 | 第71-73页 |
| 第3章 实验结果 | 第73-107页 |
| 3.1 重组质粒的构建及鉴定 | 第73-85页 |
| 3.1.1 目的基因的获得 | 第73-79页 |
| 3.1.2 重组质粒的构建及鉴定 | 第79-85页 |
| 3.2 重组腺病毒的包装及鉴定 | 第85-91页 |
| 3.2.1 重组腺病毒质粒构建 | 第85-87页 |
| 3.2.2 重组腺病毒包装 | 第87页 |
| 3.2.3 重组腺病毒扩增 | 第87-88页 |
| 3.2.4 重组腺病毒滴度测定 | 第88-89页 |
| 3.2.5 重组腺病毒鉴定 | 第89-91页 |
| 3.3 重组腺病毒联合照射的敏感肿瘤细胞株筛选 | 第91-92页 |
| 3.4 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应 | 第92-98页 |
| 3.4.1 重组腺病毒对MDA-MB-231细胞增殖的影响 | 第92-94页 |
| 3.4.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用 | 第94-96页 |
| 3.4.3 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞凋亡的影响 | 第96-98页 |
| 3.5 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中凋亡相关基因表达的影响 | 第98-107页 |
| 3.5.1 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中Smac、Cyt c、caspase-9和-3mRNA表达的影响 | 第98-104页 |
| 3.5.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中Smac、Cyt c、caspase-9和-3蛋白表达的影响 | 第104-107页 |
| 第4章 讨论 | 第107-117页 |
| 4.1 目的基因的获得 | 第108-109页 |
| 4.1.1 E1A-E1Bp和E1B55K基因的克隆 | 第108页 |
| 4.1.2 hTert启动子的克隆 | 第108-109页 |
| 4.1.3 Smac基因的克隆 | 第109页 |
| 4.1.4 Egr-1启动子的克隆 | 第109页 |
| 4.2 条件复制型腺病毒质粒的构建及病毒的包装鉴定 | 第109-111页 |
| 4.2.1 重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定 | 第110页 |
| 4.2.2 细菌内同源重组 | 第110-111页 |
| 4.2.3 重组腺病毒包装、滴度测定及鉴定 | 第111页 |
| 4.3 重组腺病毒联合照射的敏感肿瘤细胞株筛选 | 第111-112页 |
| 4.4 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制效应 | 第112-113页 |
| 4.4.1 重组腺病毒对MDA-MB-231肿瘤细胞增殖的影响 | 第112页 |
| 4.4.2 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞生长抑制的剂量效应 | 第112页 |
| 4.4.3 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞生长抑制的时程效应 | 第112-113页 |
| 4.4.4 重组腺病毒联合2.0Gy照射对MDA-MB-231细胞凋亡的影响 | 第113页 |
| 4.5 重组腺病毒联合照射对MDA-MB-231细胞中凋亡相关基因表达的影响 | 第113-117页 |
| 4.5.1 mRNA表达的变化 | 第114页 |
| 4.5.2 蛋白表达的变化 | 第114-117页 |
| 结论 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
