| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 1 植物对重金属毒害的耐性机理 | 第17-25页 |
| 1.1 排斥 | 第17-20页 |
| 1.1.1 菌根 | 第17-18页 |
| 1.1.2 细胞壁与重金属结合 | 第18页 |
| 1.1.3 根系分泌物 | 第18-19页 |
| 1.1.4 细胞膜的调解作用 | 第19-20页 |
| 1.2 积累 | 第20-25页 |
| 1.2.1 金属硫蛋白 | 第20-22页 |
| 1.2.2 植物螯合肽 | 第22-24页 |
| 1.2.3 有机酸和氨基酸 | 第24-25页 |
| 1.3 抗氧化作用 | 第25页 |
| 2 植物细胞对铜的吸收、传递及平衡调控 | 第25-28页 |
| 2.1 铜的吸收 | 第25页 |
| 2.2 铜的输出和细胞内再分配 | 第25-26页 |
| 2.3 细胞内铜传递给目的蛋白 | 第26-27页 |
| 2.3.1 铜在叶绿体内传递 | 第26页 |
| 2.3.2 细胞质中的铜伴侣分子 | 第26-27页 |
| 2.3.3 铜传递给线粒体 | 第27页 |
| 2.3.4 SOD的铜伴侣分子 | 第27页 |
| 2.4 植物体内铜平衡的调控 | 第27-28页 |
| 3 蛋白质组学研究进展 | 第28-35页 |
| 3.1 蛋白质组学的概念及研究内容 | 第28页 |
| 3.2 蛋白质组学研究技术 | 第28-31页 |
| 3.2.1 基于胶的蛋白质组学 | 第28-30页 |
| 3.2.2 基于质谱的蛋白质组学 | 第30页 |
| 3.2.3 基于芯片的蛋白质组学 | 第30-31页 |
| 3.3 植物响应重金属胁迫的蛋白质组学研究进展 | 第31-35页 |
| 3.3.1 植物响应Cd胁迫的蛋白质组学研究 | 第31页 |
| 3.3.2 植物响应砷、铝和锰胁迫的蛋白质组学研究 | 第31-32页 |
| 3.3.3 植物响应铜胁迫的蛋白质组学及铜结合蛋白质组学研究 | 第32-35页 |
| 第二章 水稻根蛋白质双向电泳技术的优化 | 第35-47页 |
| 1 材料与方法 | 第35-39页 |
| 1.1 植物材料的培养 | 第35-36页 |
| 1.2 蛋白样品的制备 | 第36-37页 |
| 1.2.1 方法A | 第36页 |
| 1.2.2 方法B | 第36-37页 |
| 1.2.3 方法C | 第37页 |
| 1.2.4 方法D | 第37页 |
| 1.3 蛋白定量 | 第37-38页 |
| 1.4 向电泳 | 第38页 |
| 1.4.1 第一向固定pH等电聚焦 | 第38页 |
| 1.4.2 胶条平衡 | 第38页 |
| 1.4.3 第二相SDS-PAGE | 第38页 |
| 1.5 凝胶染色 | 第38-39页 |
| 1.6 图像获得与分析 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.1 水稻根蛋白提取方法优化 | 第39-43页 |
| 2.1.1 不同蛋白提取方法蛋白产率分析 | 第39-40页 |
| 2.1.2 2-DE图谱分析 | 第40-43页 |
| 2.2 水稻根蛋白等电聚焦程序的优化 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 水稻根响应铜胁迫蛋白质组学研究 | 第47-66页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1.1 植物材料培养与处理 | 第48页 |
| 1.2 组织化学检测 | 第48页 |
| 1.3 蛋白提取 | 第48页 |
| 1.4 双向电泳 | 第48页 |
| 1.5 染色 | 第48-49页 |
| 1.6 图像获得与分析 | 第49页 |
| 1.7 胶内酶解 | 第49页 |
| 1.8 质谱鉴定 | 第49-50页 |
| 1.9 数据库检索 | 第50页 |
| 1.10 RNA提取和RT-qPCR分析 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-60页 |
| 2.1 铜胁迫下水稻根系表型分析 | 第51-53页 |
| 2.2 铜胁迫下水稻根尖质膜完整性和膜质过氧化的组织化学染色分析 | 第53-54页 |
| 2.3 水稻根总蛋白双向电泳分析和差异蛋白的质谱鉴定 | 第54-60页 |
| 2.4 RT-qPCR分析 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-66页 |
| 第四章 蛋白质中重金属离子的去除及对铜结合蛋白分离纯化的影响 | 第66-83页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 植物材料培养 | 第66-67页 |
| 1.2 蛋白提取 | 第67页 |
| 1.3 金属螯合柱填料的制备 | 第67页 |
| 1.4 色谱过程 | 第67-68页 |
| 1.5 固定金属(Cu~(2+))亲和层析(Cu-IMAC) | 第68-69页 |
| 1.6 植物样品重金属含量测定 | 第69页 |
| 1.7 铜结合蛋白的样品制备与双向电泳 | 第69页 |
| 1.8 凝胶染色和图像获得 | 第69页 |
| 1.9 胶内酶解 | 第69页 |
| 1.10 质谱鉴定及数据搜索 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-80页 |
| 2.1 金属螯合亲和层析凝胶对Cu~(2+)的结合量 | 第69-70页 |
| 2.2 不同的金属螯合层析柱对不同的重金属离子去除效果 | 第70-72页 |
| 2.3 铜结合蛋白的固定金属(Cu~(2+))亲和层析(Cu-IMAC) | 第72-75页 |
| 2.4 铜结合蛋白(特异性铜结合蛋白)的双向电泳分析 | 第75-77页 |
| 2.5 差异表达蛋白的质谱鉴定 | 第77-80页 |
| 2.6 鉴定的铜结合蛋白的Motif分析 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 第五章 水稻根响应铜胁迫的铜结合蛋白组学研究 | 第83-107页 |
| 1 材料与方法 | 第84-86页 |
| 1.1 植物材料培养与处理 | 第84页 |
| 1.2 蛋白样品制备 | 第84页 |
| 1.3 固定化金属(Cu~(2+))亲和层析(Cu-IMAC) | 第84页 |
| 1.4 双向电泳分离蛋白 | 第84页 |
| 1.5 凝胶染色和图像获得 | 第84-85页 |
| 1.6 胶内酶解 | 第85页 |
| 1.7 质谱鉴定及数据库搜索 | 第85-86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-95页 |
| 2.1 水稻根铜结合蛋白的固定金属亲和层析分析 | 第86-87页 |
| 2.2 水稻根铜结合蛋白的双向电泳分析 | 第87-90页 |
| 2.3 差异表达蛋白点的质谱鉴定 | 第90-95页 |
| 3 讨论 | 第95-107页 |
| 3.1 抗氧化防御和解毒相关蛋白 | 第95-98页 |
| 3.2 蛋白质合成、修饰、运输和降解相关蛋白 | 第98-101页 |
| 3.3 基因转录调控相关蛋白 | 第101页 |
| 3.4 病程相关蛋白 | 第101-102页 |
| 3.5 有关氨基酸合成的蛋白 | 第102-103页 |
| 3.6 与细胞壁合成相关蛋白 | 第103页 |
| 3.7 有关信号分子蛋白 | 第103-104页 |
| 3.8 盐胁迫诱导的蛋白 | 第104-105页 |
| 3.9 其它蛋白 | 第105-107页 |
| 第六章 全文结论 | 第107-111页 |
| 1 主要研究结论 | 第107-108页 |
| 1.1 铜胁迫下水稻根蛋白双向电泳技术的优化 | 第107页 |
| 1.2 水稻根响应铜胁迫的蛋白质组学研究 | 第107页 |
| 1.3 蛋白质中重金属离子的去除及对铜结合蛋白分离纯化的影响 | 第107-108页 |
| 1.4 水稻根响应铜胁迫的铜结合蛋白组学研究 | 第108页 |
| 2 主要创新点 | 第108-109页 |
| 3 问题与展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-143页 |
| 攻读博士学位期间发表(待发表)的研究论文及其它 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145页 |
