| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第25-28页 |
| 1 绪论 | 第28-53页 |
| 1.1 细胞周期 | 第29-35页 |
| 1.1.1 细胞周期的概述 | 第29-30页 |
| 1.1.2 细胞周期检测点 | 第30-31页 |
| 1.1.3 细胞周期相关因子 | 第31-35页 |
| 1.2 细胞周期蛋白E(cyclin E) | 第35-41页 |
| 1.2.1 cyclin E的生物学特性 | 第35-36页 |
| 1.2.2 cyclin E的功能 | 第36-38页 |
| 1.2.3 cyclin E的表达调控 | 第38-40页 |
| 1.2.4 cyclin E与肿瘤 | 第40-41页 |
| 1.3 DEC1概述 | 第41-45页 |
| 1.3.1 DEC1的生物学特性 | 第41-42页 |
| 1.3.2 DEC1参与昼夜节律系统 | 第42-43页 |
| 1.3.3 DEC1·参与CD28介导的T细胞分化成熟过程 | 第43-44页 |
| 1.3.4 DEC1参与肌肉再生和肌肉发育调控 | 第44页 |
| 1.3.5 DEC1参与脂肪细胞分化 | 第44-45页 |
| 1.3.6 DEC1与DEC2 | 第45页 |
| 1.4 DEC1与肿瘤 | 第45-49页 |
| 1.4.1 DEC1与缺氧诱导因子1 α(HIF-1α) | 第45-46页 |
| 1.4.2 DEC1与肿瘤细胞的增殖 | 第46-47页 |
| 1.4.3 DEC1与肿瘤细胞的凋亡及衰老 | 第47-49页 |
| 1.5 时钟节律与细胞周期 | 第49-50页 |
| 1.6 论文选题依据及研究内容 | 第50-53页 |
| 1.6.1 选题依据 | 第50-51页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第51-53页 |
| 2 DEC1对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第53-68页 |
| 2.1 引言 | 第53页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第53-56页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第53-54页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第54-56页 |
| 2.2.3 菌种、细胞、siRNA及质粒 | 第56页 |
| 2.3 实验方法 | 第56-63页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第56页 |
| 2.3.2 质粒转化 | 第56页 |
| 2.3.3 DEC1的小干扰RNA的合成 | 第56-57页 |
| 2.3.4 shDEC1质粒构建 | 第57-59页 |
| 2.3.5 细胞培养 | 第59页 |
| 2.3.6 细胞转染 | 第59页 |
| 2.3.7 细胞裂解 | 第59-60页 |
| 2.3.8 考马斯亮蓝法(Bradford法)测蛋白浓度 | 第60页 |
| 2.3.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第60-61页 |
| 2.3.10 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第61-62页 |
| 2.3.11 琼脂糖凝胶回收 | 第62页 |
| 2.3.12 MTT检测细胞增殖 | 第62页 |
| 2.3.13 克隆形成实验 | 第62-63页 |
| 2.4 结果与分析 | 第63-66页 |
| 2.4.1 DEC1过表达对乳腺癌细胞增殖能力的影响 | 第63-65页 |
| 2.4.2 干扰DEC1的表达对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第65-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66-67页 |
| 2.6 小结 | 第67-68页 |
| 3 DEC1的表达与细胞周期蛋白相关性的分析 | 第68-80页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第68页 |
| 3.2.2 试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第69页 |
| 3.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第69页 |
| 3.3.2 细胞转染 | 第69页 |
| 3.3.3 质粒提取 | 第69页 |
| 3.3.4 总RNA提取 | 第69页 |
| 3.3.5 反转录 | 第69-70页 |
| 3.3.6 PCR扩增目的片段 | 第70-71页 |
| 3.3.7 琼脂糖凝胶回收 | 第71页 |
| 3.3.8 流式细胞术 | 第71页 |
| 3.3.9 统计学分析方法 | 第71页 |
| 3.3.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第71页 |
| 3.3.11 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第71-72页 |
| 3.3.12 细胞同步化 | 第72页 |
| 3.4 结果与分析 | 第72-78页 |
| 3.4.1 乳腺癌细胞周期中DEC1表达的变化 | 第72-73页 |
| 3.4.2 DEC1对G1/S期检测点相关因子表达的影响 | 第73-74页 |
| 3.4.3 DEC1上调cyclin E的蛋白水平 | 第74-76页 |
| 3.4.4 不同剂量的DEC1对cyclin E蛋白水平的影响 | 第76页 |
| 3.4.5 DEC1在饥饿的状态下稳定cyclin E蛋白 | 第76-78页 |
| 3.5 讨论 | 第78-79页 |
| 3.6 小结 | 第79-80页 |
| 4 DEC1对cyclin E稳定性及蛋白酶体降解通路的影响 | 第80-92页 |
| 4.1 引言 | 第80页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第80-81页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第80页 |
| 4.2.2 试剂 | 第80-81页 |
| 4.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-82页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第81页 |
| 4.3.2 细胞转染 | 第81页 |
| 4.3.3 质粒提取 | 第81页 |
| 4.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第81页 |
| 4.3.5 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第81页 |
| 4.3.6 免疫共沉淀 | 第81-82页 |
| 4.4 结果与分析 | 第82-90页 |
| 4.4.1 DEC1对cyclin E蛋白稳定性的影响 | 第82-84页 |
| 4.4.2 DEC1对cyclin E泛素化水平的影响 | 第84-85页 |
| 4.4.3 Fbw7α介导DEC1对cyclin E稳定性的影响 | 第85-88页 |
| 4.4.4 DEC1抑制cyclin E与其泛素E3酶的相互作用 | 第88-90页 |
| 4.5 讨论 | 第90-91页 |
| 4.6 小结 | 第91-92页 |
| 5 DEC1与cyclin E之间相互作用的确定 | 第92-106页 |
| 5.1 引言 | 第92页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第92-93页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第92页 |
| 5.2.2 试剂 | 第92-93页 |
| 5.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第93页 |
| 5.3 实验方法 | 第93-99页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第93页 |
| 5.3.2 细胞转染 | 第93页 |
| 5.3.3 质粒提取 | 第93页 |
| 5.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第93-94页 |
| 5.3.5 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第94页 |
| 5.3.6 免疫荧光 | 第94页 |
| 5.3.7 哺乳动物双杂交 | 第94-96页 |
| 5.3.8 荧光素酶报告基因实验 | 第96-97页 |
| 5.3.9 GST-pull down | 第97-98页 |
| 5.3.10 细胞同步化 | 第98页 |
| 5.3.11 免疫共沉淀 | 第98-99页 |
| 5.4 结果与分析 | 第99-104页 |
| 5.4.1 DEC1与cyclin E相互作用的确定 | 第99-102页 |
| 5.4.2 DEC1与cyclin E细胞内定位情况 | 第102-103页 |
| 5.4.3 在细胞周期内DEC1与cyclin E相互作用的变化情况 | 第103-104页 |
| 5.5 讨论 | 第104-105页 |
| 5.6 小结 | 第105-106页 |
| 6 DEC1对cyclin E/Cdk2复合物的活性及细胞内定位的影响 | 第106-116页 |
| 6.1 引言 | 第106页 |
| 6.2 仪器与试剂 | 第106页 |
| 6.2.1 实验仪器 | 第106页 |
| 6.2.2 试剂 | 第106页 |
| 6.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第106页 |
| 6.3 实验方法 | 第106-108页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第106-107页 |
| 6.3.2 细胞转染 | 第107页 |
| 6.3.3 质粒提取 | 第107页 |
| 6.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第107页 |
| 6.3.5 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第107页 |
| 6.3.6 免疫荧光 | 第107页 |
| 6.3.7 免疫共沉淀 | 第107页 |
| 6.3.8 哺乳动物双杂交 | 第107页 |
| 6.3.9 cyclin E/Cdk2激酶活性实验 | 第107-108页 |
| 6.4 结果与分析 | 第108-114页 |
| 6.4.1 DEC1对cyclin E/Cdk2复合物稳定性的影响 | 第108-109页 |
| 6.4.2 DEC1对cyclin E/Cdk2复合物活性的影响 | 第109-110页 |
| 6.4.3 DEC1对cyclin A/Cdk2复合物的影响 | 第110-111页 |
| 6.4.4 DEC1对cyclin E和Cdk2细胞内定位的影响 | 第111-112页 |
| 6.4.5 DEC1与Cdk2相互作用的确定 | 第112-114页 |
| 6.5 讨论 | 第114-115页 |
| 6.6 小结 | 第115-116页 |
| 7 DEC1对细胞周期进程及乳腺癌细胞增殖的影响 | 第116-127页 |
| 7.1 引言 | 第116页 |
| 7.2 仪器与试剂 | 第116页 |
| 7.2.1 实验仪器 | 第116页 |
| 7.2.2 试剂 | 第116页 |
| 7.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第116页 |
| 7.3 实验方法 | 第116-118页 |
| 7.3.1 细胞培养 | 第116页 |
| 7.3.2 细胞转染 | 第116页 |
| 7.3.3 质粒提取 | 第116-117页 |
| 7.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第117页 |
| 7.3.5 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第117页 |
| 7.3.6 免疫共沉淀 | 第117页 |
| 7.3.7 流式细胞术 | 第117页 |
| 7.3.8 细胞同步化 | 第117页 |
| 7.3.9 哺乳动物双杂交 | 第117页 |
| 7.3.10 软琼脂细胞培养 | 第117-118页 |
| 7.4 结果与分析 | 第118-125页 |
| 7.4.1 DEC1对cyclin E/Cdk2与cyclin A/Cdk2复合物的影响 | 第118-120页 |
| 7.4.2 DEC1对细胞周期进程的影响 | 第120-123页 |
| 7.4.3 DEC1对cyclin E促乳腺癌细胞增殖的影响 | 第123-125页 |
| 7.5 讨论 | 第125-126页 |
| 7.6 小结 | 第126-127页 |
| 8 DEC1对肿瘤生长的影响 | 第127-134页 |
| 8.1 引言 | 第127页 |
| 8.2 仪器与试剂 | 第127-128页 |
| 8.2.1 实验仪器 | 第127页 |
| 8.2.2 试剂 | 第127页 |
| 8.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第127页 |
| 8.2.4 裸鼠来源及饲养 | 第127-128页 |
| 8.3 实验方法 | 第128-129页 |
| 8.3.1 细胞培养 | 第128页 |
| 8.3.2 细胞转染 | 第128页 |
| 8.3.3 质粒提取 | 第128页 |
| 8.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第128页 |
| 8.3.5 免疫印迹(Western Blot,WB) | 第128页 |
| 8.3.6 稳定表达DEC1细胞系的筛选 | 第128页 |
| 8.3.7 小鼠体内成瘤实验 | 第128-129页 |
| 8.3.8 统计学分析 | 第129页 |
| 8.4 结果与分析 | 第129-132页 |
| 8.4.1 DEC1对肿瘤生长的影响 | 第129-132页 |
| 8.4.2 体内实验中DEC1对cyclin E蛋白水平的影响 | 第132页 |
| 8.5 讨论 | 第132-133页 |
| 8.6 小结 | 第133-134页 |
| 9 结论与展望 | 第134-137页 |
| 9.1 结论 | 第134-135页 |
| 9.2 创新点摘要 | 第135页 |
| 9.3 展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-148页 |
| 作者简介 | 第148页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第148-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
