| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-12页 |
| 第一部分：文献综述 | 第12-31页 |
| 1. 猪胸膜肺炎放线杆菌综述 | 第12-15页 |
| 1.1 猪胸膜肺炎放线杆菌病原介绍 | 第12-13页 |
| 1.2 猪传染胸膜肺炎放线杆菌的流行病学研究 | 第13-14页 |
| 1.3 猪胸膜肺炎放线杆菌溶血毒素研究进展 | 第14-15页 |
| 2. 猪传染性胸膜肺炎疫苗研究进展 | 第15-18页 |
| 2.1 灭活疫苗和亚单位疫苗 | 第16页 |
| 2.2 口服疫苗 | 第16-17页 |
| 2.3 弱毒疫苗 | 第17-18页 |
| 3. 猪胸膜肺炎放线杆菌弱毒活疫苗分类概述 | 第18-24页 |
| 3.1 利用传统物理化学方法改造的弱毒活疫苗 | 第19-20页 |
| 3.2 基因工程技术构建的弱毒活疫苗 | 第20-24页 |
| 4 同源重组技术研究概述 | 第24-29页 |
| 4.1 用抗性基因作为自杀性质粒的筛选标志的双交换同源重组 | 第25-26页 |
| 4.2 加入了负向筛选标志的两步法单交换同源重组 | 第26-27页 |
| 4.3 重组转移自杀性质粒导入APP的方法 | 第27-28页 |
| 4.4 负向选择标记研究进展 | 第28-29页 |
| 5. 研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二部分：试验研究 | 第31-59页 |
| 1. 材料 | 第31-33页 |
| 1.1 实验所用菌株以及其培养条件 | 第31页 |
| 1.2 实验涉及主要试剂与仪器 | 第31-32页 |
| 1.3 质粒与载体 | 第32页 |
| 1.4 引物 | 第32页 |
| 1.5 研究所用试验动物 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-42页 |
| 2.1 同源重组载体pBOSK△ⅡC的构建 | 第33-37页 |
| 2.1.1 构建同源重组载体pBOSKAⅡC的技术流程图 | 第33页 |
| 2.1.2 同源重组初级载体pBOSK△ⅡCL的构建 | 第33-35页 |
| 2.1.3 同源重组最终载体pBOSKAⅡC的构建 | 第35-37页 |
| 2.2 APP双基因缺失突变株SW1△ⅠC/△ⅡC的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.1 APP单基因缺失突变株SW1△ⅠC感受态的制备 | 第37页 |
| 2.2.2 双基因缺失突变株的第一次同源重组筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.3 双基因缺失突变株的反向筛选 | 第38页 |
| 2.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的生物学特性研究 | 第38-39页 |
| 2.3.1 SW1△ⅠC/△ⅡC的生长曲线测定 | 第38页 |
| 2.3.2 SW1△ⅠC/△ⅡC的基因遗传稳定性 | 第38页 |
| 2.3.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的溶血活性测定 | 第38-39页 |
| 2.3.4 SW1△ⅠC/△ⅡC的细胞毒性测定 | 第39页 |
| 2.3.5 SW1△ⅠC/△ⅡC的毒素体外表达检测 | 第39页 |
| 2.4 SW1△ⅠC/△ⅡC的免疫原性研究 | 第39-42页 |
| 2.4.1 SW1△ⅠC/△ⅡC对小鼠的毒力试验及其LD_(50)测定 | 第39-40页 |
| 2.4.2 SW1△ⅠC/△ⅡC的小鼠免疫保护试验 | 第40-41页 |
| 2.4.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的免疫抗体检测 | 第41-42页 |
| 3. 结果 | 第42-54页 |
| 3.1 同源重组载体pBOSK△ⅡC的构建 | 第42-45页 |
| 3.1.1 左同源臂(L)的扩增及TA克隆 | 第42页 |
| 3.1.2 左同源臂(L)连接同源重组转移载体pBOSK△IC,构建同源重组中间载体 | 第42-43页 |
| 3.1.3 右同源臂(R)的扩增及TA克隆 | 第43-44页 |
| 3.1.4 右同源臂基因连接到pBOSK△ⅡCL,构建同源重组最终载体 | 第44-45页 |
| 3.2 双基因缺失突变株SW1△ⅠC/△ⅡC的筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.1 双基因缺失突变株的第一次同源重组筛选 | 第45页 |
| 3.2.2 APP重组菌的负向筛选 | 第45-46页 |
| 3.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的生物学特性研究 | 第46-50页 |
| 3.3.1 SW1△ⅠC/△ⅡC的生长曲线测定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 SW1△ⅠC/△ⅡC的基因遗传稳定性 | 第47-48页 |
| 3.3.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的溶血活性试验 | 第48页 |
| 3.3.4 SW1△ⅠC/△ⅡC的细胞毒性测定 | 第48-49页 |
| 3.3.5 SW1△ⅠC/△ⅡC的毒素体外表达检测 | 第49-50页 |
| 3.4 SW1△ⅠC/△ⅡC的免疫原性研究 | 第50-54页 |
| 3.4.1 SW1△ⅠC/△ⅡC对小鼠的毒力及其LDso测定 | 第50-51页 |
| 3.4.2 SW1△ⅠC/△ⅡC的小鼠免疫保护试验 | 第51-52页 |
| 3.4.3 SW1△ⅠC/△ⅡC的免疫抗体检测 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| 4.1 所用胸膜肺炎放线杆菌亲本株的选择 | 第54页 |
| 4.2 关于同源重组载体pBOSK△ⅠC的讨论 | 第54-55页 |
| 4.3 所缺失基因以及同源臂长短的讨论 | 第55-56页 |
| 4.4 pBOSK△ⅡC同源重组载体的构建 | 第56页 |
| 4.5 双基因缺失株的筛选鉴定 | 第56-57页 |
| 4.6 缺失突变株SW1△ⅠC/△ⅡC的毒力与免疫保护力 | 第57-58页 |
| 4.7 缺失突变株SW1△ⅠC/△ⅡC的应用前景 | 第58-59页 |
| 第三部分：结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
