| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第15-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-29页 |
| 1 研究问题由来 | 第16-17页 |
| 2 铁代谢通路研究进展 | 第17-20页 |
| 2.1 铁代谢：吸收、循环与贮存 | 第17-18页 |
| 2.2 铁代谢通路的调控 | 第18-19页 |
| 2.3 铁代谢与先天性免疫 | 第19-20页 |
| 3 铁蛋白研究进展 | 第20-25页 |
| 3.1 铁蛋白的分类 | 第20-21页 |
| 3.2 铁蛋白的结构与功能 | 第21-22页 |
| 3.3 铁蛋白的细胞定位 | 第22页 |
| 3.4 铁蛋白的表达调控 | 第22-23页 |
| 3.4.1 铁对铁蛋白的表达调控 | 第22-23页 |
| 3.4.2 低氧胁迫和氧化剂对铁蛋白的表达调控 | 第23页 |
| 3.5 铁蛋白与先天性免疫 | 第23-24页 |
| 3.6 铁蛋白在鱼类中的研究进展 | 第24-25页 |
| 4 转铁蛋白研究进展 | 第25-27页 |
| 4.1 转铁蛋白的结构、分类与功能 | 第25-26页 |
| 4.2 转铁蛋白-受体复合体 | 第26页 |
| 4.3 转铁蛋白与先天性免疫 | 第26-27页 |
| 4.4 鱼类转铁蛋白的研究进展 | 第27页 |
| 5 选题目的与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-46页 |
| 1 实验材料 | 第29-32页 |
| 1.1 样品采集 | 第29页 |
| 1.2 所用载体 | 第29-30页 |
| 1.3 所用细胞 | 第30页 |
| 1.4 实验试剂 | 第30-31页 |
| 1.5 常用溶液配方 | 第31页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-46页 |
| 2.1 总RNA抽提 | 第32-33页 |
| 2.2 总RNA反转录 | 第33-34页 |
| 2.3 RACE PCR克隆基因cDNA全长 | 第34页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 2.5 Western Blot | 第35-36页 |
| 2.6 序列及进化分析 | 第36页 |
| 2.7 质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.7.1 原核表达质粒构建 | 第36-37页 |
| 2.7.2 真核表达质粒构建 | 第37页 |
| 2.8 重组蛋白的诱导表达及检测 | 第37-38页 |
| 2.9 可溶性重组蛋白纯化 | 第38页 |
| 2.10 可溶性重组蛋白活性检测 | 第38-39页 |
| 2.11 活性重组蛋白免疫保护作用检测 | 第39页 |
| 2.12 多克隆抗体制备 | 第39-40页 |
| 2.13 免疫组化 | 第40页 |
| 2.14 免疫荧光 | 第40-41页 |
| 2.15 嗜水气单胞菌侵袭实验 | 第41页 |
| 2.16 L8824细胞实验 | 第41-44页 |
| 2.16.1 细胞传代培养 | 第41页 |
| 2.16.2 细胞冻存保藏及冻存细胞的复苏 | 第41-42页 |
| 2.16.3 细胞转染及RNA/蛋白抽提 | 第42-43页 |
| 2.16.4 过表达质粒（DNA）转染后下游免疫通路抑制剂刺激 | 第43页 |
| 2.16.5 细胞转染及荧光素酶活性分析 | 第43-44页 |
| 2.17 数字表达谱测序及分析 | 第44-45页 |
| 2.17.1 L8824细胞样品及RNA提取 | 第44页 |
| 2.17.2 文库构建及测序 | 第44页 |
| 2.17.3 测序数据质量评估 | 第44页 |
| 2.17.4 参考基因组比对分析 | 第44页 |
| 2.17.5 基因表达水平分析 | 第44-45页 |
| 2.17.6 差异表达分析 | 第45页 |
| 2.17.7 差异基因GO富集分析 | 第45页 |
| 2.17.8 差异基因KEGG富集分析 | 第45页 |
| 2.18 数据分析 | 第45-46页 |
| 第三章 结果与分析 | 第46-93页 |
| 1 MamFers基因克隆、表达及重组蛋白活性检测 | 第46-61页 |
| 1.1 MamFers基因克隆及生物信息学分析 | 第46-51页 |
| 1.2 MamFerH和MamFerM组织和发育期表达分析 | 第51-53页 |
| 1.3 细菌感染后MamFerH和MamFerM的表达分析 | 第53-54页 |
| 1.4 MamFerH和MamFerM的免疫组化及亚细胞定位分析 | 第54-57页 |
| 1.5 MamFerH和MamFerM在Fe2+刺激后的表达分析 | 第57页 |
| 1.6 MamFerH和MamFerM重组蛋白表达、活性检测及抗体制备 | 第57-59页 |
| 1.7 rMam FerH和rMam FerM抑菌及免疫保护作用检测 | 第59-61页 |
| 2 MamTf基因克隆、表达及重组蛋白活性检测 | 第61-71页 |
| 2.1 MamTf基因克隆及生物信息学分析 | 第61-65页 |
| 2.2 MamTf组织和发育期表达分析 | 第65-66页 |
| 2.3 细菌感染后MamTf/Mam TfR1的表达分析 | 第66-67页 |
| 2.4 MamTf/Mam TfR1免疫组化及普鲁士蓝染色分析 | 第67-69页 |
| 2.5 MamTf重组蛋白表达、活性检测、抗体制备 | 第69-70页 |
| 2.6 rMam Tf蛋白抑菌作用检测 | 第70-71页 |
| 3 L8824细胞基因过表达后数字表达谱及差异基因筛选 | 第71-79页 |
| 3.1 RNA质量分析 | 第71-73页 |
| 3.2 测序结果及质量分析 | 第73-74页 |
| 3.3 差异表达分析 | 第74-79页 |
| 3.3.1 差异表达基因筛选 | 第74-75页 |
| 3.3.2 差异表达基因通路分析 | 第75页 |
| 3.3.3 qRT-PCR验证差异表达基因 | 第75-79页 |
| 4 MamFers和MamTf对免疫和铁代谢的调控作用研究 | 第79-93页 |
| 4.1 MamFers和MamTf对细菌粘附的调控作用研究 | 第79-84页 |
| 4.1.1 MamFers和MamTf调控嗜水气单胞菌粘附过程 | 第79-81页 |
| 4.1.2 FN介导MamFers和MamTf对嗜水气单胞菌的粘附调控 | 第81-82页 |
| 4.1.3 Intgβ1 介导MamFers和MamTf对嗜水气单胞菌的粘附调控 | 第82-84页 |
| 4.2 MamFers和MamTf对细胞因子的调控作用 | 第84-89页 |
| 4.2.1 MamFers和MamTf对细胞因子的表达调控 | 第84-85页 |
| 4.2.2 NFκB介导MamFers和MamTf对细胞因子的表达调控 | 第85-87页 |
| 4.2.3 MAPK介导MamFers和MamTf对细胞因子的表达调控 | 第87-89页 |
| 4.3 β2M介导MamFers和MamTf对hepcidin的调控作用 | 第89-93页 |
| 4.3.1 MamFers和MamTf对β2M的表达调控 | 第89-91页 |
| 4.3.1.1 MamFers和MamTf对β2M/MHC I轴的表达调控 | 第89页 |
| 4.3.1.2 NLRC5介导MamFers和MamTf对β2M/MHC I的表达调控 | 第89-91页 |
| 4.3.2 β2M介导MamFers和MamTf对hepcidin的调控作用 | 第91-93页 |
| 4.3.2.1 MamFers和MamTf对hepcidin的表达调控 | 第91-92页 |
| 4.3.2.2 β2M介导MamFers和MamTf对hepcidin的表达调控 | 第92-93页 |
| 第四章 讨论 | 第93-102页 |
| 1 MamFers基因序列分析、表达及重组蛋白活性检测 | 第93-95页 |
| 2 MamTf基因序列分析、表达及重组蛋白活性检测 | 第95-97页 |
| 3 MamFers和MamTf过表达后的数字表达谱分析 | 第97-98页 |
| 4 MamFers和MamTf对免疫和铁代谢的调控作用研究 | 第98-102页 |
| 结论 | 第102-104页 |
| 1 本文小结 | 第102页 |
| 2 创新之处 | 第102-103页 |
| 3 不足之处 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-122页 |
| 附录 | 第122-131页 |
| 研究生期间发表论文及获奖情况 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
