| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 迟钝爱德华氏菌 | 第10-12页 |
| 1.1.1 迟钝爱德华氏菌 | 第10-11页 |
| 1.1.2 迟钝爱德华氏菌的毒力调控网络 | 第11页 |
| 1.1.3 迟钝爱德华氏菌T6SS效应子EvpP | 第11-12页 |
| 1.2 组蛋白样类核结构蛋白H-NS | 第12-18页 |
| 1.2.1 类核蛋白H-NS的结构与主要功能 | 第12-14页 |
| 1.2.2 H-NS对DNA序列的识别 | 第14-15页 |
| 1.2.3 H-NS沉默转录的作用机制 | 第15页 |
| 1.2.4 H-NS与其它类核蛋白的相互作用 | 第15-16页 |
| 1.2.5 H-NS异源基因沉默作用的解除途径 | 第16-18页 |
| 1.3 本论文的主要内容和意义 | 第18-19页 |
| 第2章 hns突变株、回补株和过表达株构建及表型分析 | 第19-33页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.2.1 菌种、质粒、引物和培养基 | 第19页 |
| 2.2.2 分析材料和软件 | 第19页 |
| 2.2.3 主要试剂及仪器设备 | 第19-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-27页 |
| 2.3.1 △1505和△2968框内缺失突变株的构建及筛选 | 第22-25页 |
| 2.3.2 hns过表达菌株15050E和29680E及hns回补株2968~+的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.3 野生株E.tarda EIB202和hns各突变株生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 半致死剂量(Lethy Dosage 50，LD_50)的测定 | 第27页 |
| 2.4 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.4.1 hns基因分析 | 第27页 |
| 2.4.2 插入失活突变株1505IM和框内缺失突变株△2968的构建 | 第27页 |
| 2.4.3 hns过表达菌株1505OE和2968OE及,△2968的回补株2968~+的构建 | 第27-28页 |
| 2.4.4 野生毒株E.tarda EIB202和hns各突变株及过表达株生长曲线的测定 | 第28-30页 |
| 2.4.5 对模式动物斑马鱼的LD_(50) | 第30-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32页 |
| 2.6 本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 H-NS蛋白的异源表达及纯化 | 第33-41页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、引物和培养基 | 第33-34页 |
| 3.2.2 分析材料及分析软件 | 第34页 |
| 3.2.3 主要试剂及仪器设备 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.3.1 H-NS蛋白异源表达株的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组蛋白的异源可溶性诱导表达 | 第35页 |
| 3.3.3 可溶性蛋白粗提物的制备 | 第35页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE 电泳 | 第35页 |
| 3.3.5 Western blot分析 | 第35-36页 |
| 3.3.6 H-NS蛋白的分离纯化 | 第36页 |
| 3.3.7 Bradford蛋白浓度定量法 | 第36-37页 |
| 3.4 实验结果 | 第37-39页 |
| 3.4.1 H-NS-1505和H-NS-2968蛋白序列及结构域分析 | 第37页 |
| 3.4.2 H-NS蛋白异源表达株的构建 | 第37页 |
| 3.4.3 H-NS蛋白的诱导表达及Western blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4.4 H-NS蛋白的纯化及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 3.6 本章小结 | 第40-41页 |
| 第4章 H-NS对T6SS效应子EvpP的调控作用 | 第41-54页 |
| 4.1 前言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.2.1 菌种、质粒、引物和培养基 | 第41页 |
| 4.2.2 分析材料及分析软件 | 第41页 |
| 4.2.3 主要试剂及仪器设备 | 第41-42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-43页 |
| 4.3.1 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第42页 |
| 4.3.2 evpP启动子与ORF区域DNA片段的分区及扩增 | 第42-43页 |
| 4.3.3 电泳迁移率变动分析实验(EMSA) | 第43页 |
| 4.3.4 DNase I footprinting实验 | 第43页 |
| 4.3.5 DNA弯曲度分析 | 第43页 |
| 4.4 实验结果 | 第43-48页 |
| 4.4.1 E.tarda EIB202中evpP基因启动子序列分析 | 第43-44页 |
| 4.4.2 E.tarda EIB202中H-NS对evpP转录水平的调控 | 第44-45页 |
| 4.4.3 EMSA实验检测H-NS与evpP基因区域的结合作用 | 第45-47页 |
| 4.4.4 H-NS-1505与evpP结合位点序列分析 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-53页 |
| 4.6 本章小结 | 第53-54页 |
| 第5章 H-NS与EsrB对T6SS效应子EvpP的共调控关系 | 第54-63页 |
| 5.1 前言 | 第54页 |
| 5.2 实验材料 | 第54-57页 |
| 5.2.1 菌种、质粒、引物和培养基 | 第54页 |
| 5.2.2 主要试剂及仪器设备 | 第54-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57页 |
| 5.3.1 使用Octet Qke检测分子相互作用 | 第57页 |
| 5.3.2 细菌双杂交实验 | 第57页 |
| 5.4 实验结果 | 第57-60页 |
| 5.4.1 EsrB蛋白异源表达株的构建、诱导表达及鉴定 | 第57-58页 |
| 5.4.2 Octet分子相互作用仪检测H-NS与EsrB对evpP基因区域结合作用 | 第58-59页 |
| 5.4.3 EMSA实验检测EsrB对evpP基因区域分区片段的结合情况 | 第59页 |
| 5.4.4 细菌双杂交实验考察H-NS与EsrB的相互作用 | 第59-60页 |
| 5.5 讨论 | 第60-62页 |
| 5.6 本章小结 | 第62-63页 |
| 第6章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 6.1 结论 | 第63页 |
| 6.2 创新点 | 第63-64页 |
| 6.3 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
