绵羊早孕因子蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩略词 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 早孕因子的来源 | 第10页 |
| 1.2 早孕因子的本质及生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.3 早孕因子的生物学作用 | 第11-12页 |
| 1.3.1 免疫抑制调节作用 | 第11-12页 |
| 1.3.2 生长调节中的作用 | 第12页 |
| 1.4 早孕因子的应用 | 第12-14页 |
| 1.4.1 超早孕检测 | 第12-13页 |
| 1.4.2 胚胎监控 | 第13页 |
| 1.4.3 肿瘤细胞的早期诊断 | 第13-14页 |
| 1.4.4 其他方面的应用 | 第14页 |
| 1.5 早孕因子分离纯化 | 第14-15页 |
| 1.6 早孕因子的检测 | 第15页 |
| 1.7 早孕因子的应用前景 | 第15页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.2 实验动物与主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第17-20页 |
| 2.2 实验步骤 | 第20-38页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取和检测 | 第20-21页 |
| 2.2.2 反转录合成 cDNA | 第21-22页 |
| 2.2.3 目的基因扩增 | 第22-24页 |
| 2.2.4 目的基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR 鉴定 TA 克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.6 酶切鉴定 TA 克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.7 TA 克隆基因测序 | 第27页 |
| 2.2.8 目的基因与表达载体双酶切 | 第27-29页 |
| 2.2.9 切胶回收 | 第29-30页 |
| 2.2.10 目的基因与表达载体连接 | 第30-31页 |
| 2.2.11 表达重组子 PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.12 表达重组子酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.13 表达重组子基因测序 | 第33页 |
| 2.2.14 表达重组质粒转化表达感受态 | 第33页 |
| 2.2.15 蛋白表达与检测 | 第33-35页 |
| 2.2.16 蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.17 透析袋的使用预处理： | 第36页 |
| 2.2.18 免疫动物 | 第36-37页 |
| 2.2.19 抗体滴度检测 | 第37页 |
| 2.2.20 多克隆抗体特异性检测 | 第37页 |
| 2.2.21 绵羊妊娠检测多克隆抗体 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 3.1 目的基因的获得 | 第38页 |
| 3.2 TA 克隆重组质粒 PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 TA 克隆重组质粒酶切结果 | 第39页 |
| 3.4 表达重组子 PCR 鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.5 表达重组子酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.6 测序结果 | 第41-42页 |
| 3.7 Western Blot 结果 | 第42-43页 |
| 3.8 绵羊 EPF 抗血清效价检测 | 第43-44页 |
| 3.9 抗体特异性鉴定 | 第44页 |
| 3.10 羊妊娠检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 早孕因子蛋白的制备 | 第45-47页 |
| 4.2 多克隆抗体的制备 | 第47-48页 |
| 4.3 展望 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
